转座因子.ppt

(一)反转座子 反转座子的转座过程是以RNA为中间体。根据反转座子的两端是否具有类似反转录病毒原病毒的长末端重复序列LTR而分为两种类型： LTR-反转座子(LTR-retrotransposon)和非LTR-反转座子(non LTR-retrotransposon)。 它们的共同特征是在转座过程中，即要经过一个RNA阶段，再经反转录成DNA后插到靶位上。 1.LTR-反转座子(LTR-retrotransposon) LTR-反转座子的结构类似于反转录病毒，与反转录病毒的主要区别是反转座子不具有侵染性和不带有病毒外膜基因(env)。 反转座子的特征是具有长的末端正向重复序列(LTR)，中央含有1～3个大的阅读框架。反转座子结构中的gag编码核酸结合蛋白，pol编码蛋白酶(PR)、整合酶(IN)、反转录酶(RT)及RNase H(RH)。 根据pol中的基因产物顺序，又可将LTR-反转座子分为两个组：Copia组和Gypsy组。Gypsy组，其编码区的结构类似于反转录病毒，其“env”区的位置与反转录病毒的相同，但其核酸序列却与反转录病毒的env序列不同。 第一步是两个Tn5转座酶单体分子的N-端分别与转座子的两个末端(19 bp)结合； 第二步是两个单体酶分子二聚体化，将转座子从宿主DNA上切割出来； 第三步是选择寄主DNA靶位点，在转座酶的催化下使靶DNA序列产生交错切割，然后转座子的游离3ˊ-OH整合到寄主DNA上； 第四步是Tn5转座子整合到寄主DNA上后，在转座子两端形成的各9 bp单链缺口，由寄主酶体系进行填充反应。最后转座酶被释放出来。 (2) Tn3的转座 Tn3全长为4957bp，两端各有由38个碱基对组成的反向重复序列，其间含有三个结构基因，bla基因编码β-内酰胺酶，使寄主对氨苄青霉素产生抗性，但在转座中不起作用。 tnpA基因是一个大基因，占Tn3长度的60%以上，编码1021个氨基酸的转座酶，分子量为120KDa。该转座酶负责识别切割转座子的两端以及在靶位点造成缺口。 tnpR基因编码含有185个氨基酸的(23KDa)蛋白质，具有解离酶活性，还具有调控tnpA基因及自身基因转录的阻遏蛋白活性，tnpA和tnpR基因之间是解离位点(res)或称为重组位点，它是TnpR解离酶的作用位点(图4)。 ? 实验证明，当带有两个质粒(其中一个质粒含Tn3)的细胞经过一段时间培养后，可以以10-7的机率发现两个质粒融合形成的中间体，即共整合体(cointegrate)。 Tn3在共整合体中复制，从一个拷贝变成两个。共整合体是不稳定的中间体，TnpR解离酶作用于tnpA和tnpR之间的res位点，催化共整合体通过二个Tn3拷贝进行的专一位点重组，使共整合体解离成为各带一个Tn3的两个质粒，从而实现了Tn3向另一质粒的转座(图10-11)。 如果突变破坏了TnpR解离酶的活性，则细胞内只形成共整合体而无法使之拆分。 四、转座噬菌体(Mu噬菌体) 转座噬菌体是具有转座功能的一类可引起突变的溶源性噬菌体。这类噬菌体不论是进入裂解循环还是处于溶源状态，均可整合到寄主染色体上。 1. Mu 噬菌体的遗传图 Mu噬菌体(mutator phage)，即突变者的意思。它是大肠杆菌的一种温和噬菌体，按理每一种温和噬菌体应整合到宿主染色体的一定位置上，如象λ噬菌体的整合位置是一定的。 可是Mu几乎可插入到宿主染色体任何一个位置上。另外它的两端没有粘性末端，插入基因中就引起该基因突变。 Mu DNA为线状双链分子，长度为37 kb。 Mu DNA不含末端反向重复序列，这是和其它转座子不同的地方。 游离Mu噬菌体DNA的两端连接着一段寄主DNA，左端的约长100bp，右端的约长1500bp。这两段寄主DNA序列在不同Mu DNA上各不相同，因为它们是在噬菌体成熟阶段，将整合在寄主DNA中的原噬菌体Mu两端的进行切割而包装时获得的。 当Mu噬菌体再一次整合到寄主DNA中时这两段序列则消失。 1) 基因A和B编码转座酶，其中A蛋白是所有转座过程中都必需的，而B蛋白只是复制型转座所必需的。 2)C基因产物对转座酶基因的表达起阻遏抑制作用。 3)转座时需要Mu DNA的两个末端，即attL和attR(有时叫做MuL和MuR)。 4)当Mu DNA被包被在噬菌体头部时，DNA的左末端带有约长100bp的寄主DNA，右末端带有约长1500bp的寄主DNA。 ? 2. Mu 噬菌体的生活史 当Mu 噬菌体侵染寄主时，其线性D