洗涤剂用碱性纤维素酶产生菌的菌种选育.pdfVIP

维普资讯 第20卷第2期 南京师大学报(自然辩学晦) VOl_20No．2 1997担 JOURNALOFNANJINGNORMALUNIVERSITY(NstursiSclenoe) l997 矿 洗涤剂用碱性纤维素酶产生菌的菌种选育 ‘ _， 郑卫①全文海 余晓斌@ 一 一 ． 捕要 以实验室提供的一株嗜碱性芽孢杆菌V1—1—3为出发菌株，经过甲基磺酸乙瞎(EMS)的二 次诱变处理及青霉素、链霉素、万古霉素和头孢霉素等抗性平板的筛选，得到一株耐青霉素的高产 变异新菌株，产纤维素爵的能力大大提高，酶活(发酵藏)从15．20u／mL提高到29．36u／mL． 关_调墅堡童!堕堡蔓堑 ，甲基臻酸乙寓，运L 分娄号 Q93-33 源 一 商 1 引言 利用生物技术开发洗涤用酶，并把这些酶适当组合添加到洗涤剂中制成加酶洗涤剂，将显 著提高洗涤效果，并可节约洗涤活性物用量，减少环境污染，是 目前世界洗涤剂工业发展的趋 势 “．碱性纤维素酶作为一种新型洗涤用酶，能直接作用于棉纤维的非结晶区而去除侵入织 物内部的尘泥、皮脂，是一种全新去污莉，洗涤效果更令人满意 ]．至今发现的碱性纤维素酶产 生苗大多是噜碱性芽孢杆菌，它是目前唯一见报井已工业化生产的菌种，而我国这方面的研究 尚处空白．本文的工作旨在通过EMs诱变及抗性平板筛选等手段，以一株产纤维素酶活力已 达 13．15u／mL的芽孢杆菌为出发菌株，筛选出产酶能力更高的新菌株． 2 材料和方法 2．1 蕾种 由本课题组筛选提供的噜碱性芽孢杆菌V1-1-3． 2．2 主要实验药吕 所用主要药品来源如下：菝甲基纤维索钠(CMC)：高粘，上海化学试剂公司(配培养基 用)；CMCz高粘，SANYO-Z7649，广州化学试荆薮璃仪器批发部(测定酶活用){头孢唑啉钠 (先锋霉素5号)：上海新亚制药厂；硫酸链霉素：镇江市第二制药厂}万古霉素：日本盐野义制 药株式会社；青霉索钠：苏州第二制药厂}甲基磺酸乙醇(EMS)：广州市化学试剂厂{其余化学 药品皆为A．R级． 2．3 培葬基及培养条件 2．3．1 瞢遣平板培养基及培养条件 CMC2．0 、葡萄糖0．2 、KH：PO。0．1、琼脂1．2 、牛肉膏0．5 、酵母膏0．4 、曲 利本蓝0．01 、Na2CO；1 (分开灭菌)，34C下培养48h． 2．3．2 种子培养基及培养条件 蔗糖0．5 、牛肉膏 1．5 、酵母膏0．5 、KH：PO．0．1 、NaCO0．75 (分开灭菌)、装 ·收精日期；i997—4—4． 作者单位，①南京师范大学生袖暴．210097，南京I@无售轻工大学生袖工程学院，2]4036，无鲁 69— 维普资讯 南京师大学报(自然科学舨) 第z0卷第2期(1997年) 液量25mL／250mL三角瓶，32~34℃，旋转摇床200rpm，培养24h 2．3．3 发酵培养基及培养条件 麸皮2．5 、CMC0．6％、牛肉膏2．0％、酵母膏0．5 、KH2PO．0．1 ，葡萄糖 0．2 、味 精 0．5 、NaCO 1．0 (分开灭菌)，接种量 4 ，装液量 25mL／g50mL三角瓶，旋转摇床 200rpm，34℃下培养48h． 2．4 实验方法 2．4．1 抑制因子最低浓度(MIC)的确定 在普通平板培养基中不加Na：CO 而以Tris—HC1缓冲液(p