对虾白斑综合症口服卵黄抗体研制.pdfVIP

摘要 白斑综合症(whitespotsyndrome，Wss)是当前全球对虾养殖业所面临的危 害性最大影响范围最广的病害之 ，并成为目前制约养虾业发展的主要瓶颈之 一。正因如此，世界各国的水产病害专家均对wsSV投入了极大关注。根据实 际需要，本研究致力于开发抗wssv的口服蛋黄抗体制剂，以寻找一种防治wss 简单有效的新方法。 首先，本实验用改进的简单有效的wSsV差速离心法对病虾虾鳃组织进行 病毒提纯，并与目前广泛采用的超速离心法作了比较后，得出差速离心完全可以 替代超速离心的结论；然后用提纯的病毒以不同剂量加福氏佐剂对蛋鸡免疫后， 间接ELIsA方法观察抗体的生成规律，确认合适的wssv免疫程序为首免 lOOug，以后每隔两周加强免疫1次，并且剂量加大一倍，经过三次免疫，可以 在卵黄中检测到高效价的抗体，且持续时间超过两个月。接下来我们对卵黄抗体 的分离纯化及适合大规模制备的工艺进行了研究，经水稀释及盐析两个简单的步 骤得到了纯度为80％左右的抗体溶液，在进一步的SephadexG一25及DEAE纤 维素柱层析纯化后，得到了纯度高达97．3％的卵黄抗体；然后通过不同方式的卵 黄抗体喷雾干燥实验，证实了直接喷雾抗体损失不大，且在添加了保护剂后还能 进一步的保持抗体活性，认定喷雾干燥是简单易行的大规模卵黄抗体制备方法。 最后我们用喷雾制备的卵黄粉添加到对虾基础日粮中。深入研究了不同剂量口服 卵黄抗体对wssV人工攻毒条件下对螯虾的保护效果，结论是20％的卵黄添加 量能够在一定程度上延缓螯虾的死亡时间，而40％的卵黄添加量则能够使螯虾 的死亡率从100％降至30％左右，且预饲组与非预饲组差别不明显。 本实验通过一系列的步骤对WSsV卵黄抗体的生成、制备工艺及应用效果 的探索研究，从而为wssV蛋黄抗体的开发应用提供了关键的技术平台和理论 依据。目前国内尚无同类产品的开发，经检索国际专利亦无本项目设计的工艺及 适应症，预测该项目具有较大的市场丌发潜能。 关键词：wssV病毒纯化 州接巨LIsAIgY分离纯化 口服IgY 抗病效果 Abstract the 910balshrimpfarnlingjndustr)rcurrently WSS(WhiteSpotSyndTome)，whjch oncoftlle the harnlfuldisease thewidest become face，isgreatest a＆cting range，and main int11e of is theworld bottlenecks developmemshrimp胁in晷Thatwhy investedconcemto toactual diseaSe needs，our aquatic experts great WSS．According researchdedicateto theoralanti-WSSV forthefoundation develop IgYpreparations ofa ande虢 simple 独创性声明 本人声明所里交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研 究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他 人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得湖南农业大学或其它教育机构 的学位或证书而使用过的材料