里氏木霉(Trichoderma_reesei)产纤维素酶液态发酵条件的研究.pdfVIP

维普资讯 里 氏木霉 (Trichodermareesei)产纤维素酶液态发酵条件的研究 胡彩静 代淑梅 李秋园 (唐山市冀东溶剂有限公司生物技术研发 中心 ，唐山，063030) 摘 要 对纤维素酶高产菌株里 氏木霉 (Trichodermareesei)ZU一03产纤维素酶 的液态发酵条件进行 了研 究，确 定 了适宜的培养基配方和最佳发酵工艺条件 。最优培养基配方及发酵条件为 ：培养基起始 pH4．5，C 8：1，纸 浆浓度 30g ，培养温度 28℃，接种量 10％(v )，摇床转速 150rm／in，培养时间4d。在此优化发酵条件下，摇 瓶发酵液 中的纤维素酶 FPA活力达 l1．67IU ／inL，比初始发酵条件 下酶活力提高近 3倍 。同样在此优化条件 下还进 行 了5rn0罐 的中试 ，FPA活力达 8．62Iu L。 关键词 里 氏木霉 ，纤维素酶 ，发酵条件 ，优化 纤维素酶的来源十分广泛 ，其 中来 自微生物的有 1．5。 真菌 、细菌，还有放线菌 。迄今为止 ，产纤维素酶能力 1．1．4 摇瓶产酶培养基 最强的微生物是木霉属的菌种 ，最常用的是里 氏木霉 葡萄糖 5g／L，蛋 白胨 1g／L，Mandels微量元素 (T．reesei)。目前 ，我国对里氏木霉产酶的研究报道 盐溶液 1．0mL／L，吐温 801．0mL／L，用 H2SO4调 较多 ，许多学者对影响里 氏木霉液态深层发酵产酶的 pH。产酶用碳源 品种及浓度根据实验需要而定，营 诸多条件进行了深入的研究，并不同程度地提高了酶 养盐的加量按一定的C／N加入 。营养盐与微量元素 活[卜6l。 盐溶液的组成同种子培养基。 本研究选用纤维素酶高产菌株里 氏木霉 ZU一03， 上述培养基在 121℃下湿热灭菌 30min。 通过对培养基 中碳源组成等培养条件的优化 ，来提高 1．1．5 5m3通气罐产酶培养基 纤维素酶的产率，降低产酶成本，并将优化结果扩大 使用外购的废纸浆 ，加水在配料槽配成固形物为 到中试水平 。 3％的发酵液 ，用 H2S04中和至pH4．5。营养盐的加 量按 C =8：1加入。营养盐与微量元素盐溶液 的 1 实验材料与方法 组成 同上 。 1．1 实验材料 上述培养基在 121℃下湿热灭菌 60rain。 1．1．1 菌 种 1．2 实验方法 里氏木霉 (Trichodermareesei)ZU一03，来 自美国 1．2．1 种子制备 普渡大学 (PurdueUniversity)可再生 资源工程 实验 在装有 50mL液体种子培养基的250mL三角 室 ，为纤维素酶生产菌种。 瓶中，用孢子接种器在里 氏木霉斜面种子上挑取 1环 将菌种移接到 PDA斜面上 ，30℃培养 7d后 ，于 孢子 ，在 30℃，150r／min摇床上培养 2d，作为液体 4℃冰箱 中保存备用。斜面菌种每月转接 1次。 种子 。 1．1．2 斜面种子培养基 1．2．2 摇瓶发酵培养 PDA培养基 ：马铃薯去皮后，切碎 煮沸 30min， 按一定的接种量接入盛有 100mL产酶培养 基 然后用双层纱布过滤 ，滤液 内加入葡萄糖及琼脂，融 的500mL三角瓶 中，在 回转式摇床