一株脱氧雪腐镰刀菌烯醇生物转化菌的分离,鉴定和转化效果的初步研究.pdfVIP

一株脱氧雪腐镰刀菌烯醇生物转化菌的分离，鉴定和 转化效果的初步研究1 何成华，樊彦红，刘国芳，张海彬 南京农业大学动物医学院，江苏南京（210095 ） E-mail ：hechenghua2006@ 摘 要：以脱氧雪腐镰刀菌烯醇（DON ）为唯一碳源，通过富集培养从土壤中分离到一株 可以生物转化DON 的真菌，编号为A-DON 。用真菌引物Bt2a 和Bt2b 扩增了该菌的β-tubulin 基因序列，通过 β-tubulin 基因序列分析和形态学观察最终鉴定该菌株为塔宾曲霉 （Aspergillus tubingensis ）。该菌的β-tubulin 基因序列在GenBank 的登录号为DQ902579 ， 其与塔宾曲霉AY820009 的相似性为99%。在pH6 ，30℃，14d 内其对DON 的平均转化率 为94.4%。通过对DON 的转化产物的HPLC-MS-MS 分析，结果表明转化产物的分子量为 314.4D ，与DON 的分子量（296.3D ）相比增加了18.1D，其机理可能是DON 的主要毒性基 团12，13-环氧环打开变成了两个羟基，其分子量就成了 314.4D。该菌在无机盐中对DON 的耐受浓度高为40mg/L ，可望用于霉败饲料的脱毒，为DON 的生物转化提供了一种新的 途径。 关键词：脱氧雪腐镰刀菌烯醇，生物转化，分离，鉴定，β-tubulin 基因 0. 引 言 脱氧雪腐镰刀菌烯醇（Deoxynivalenol ，DON ），又名为呕吐毒素（vomitoxin ），其化 学名为3，7，15-三羟基-12,13-环氧单端孢霉-9-烯-8-酮，为雪腐镰刀菌烯醇的脱氧衍生物， 是单端孢霉烯族毒素中的一种，主要是某些镰刀菌产生的次级代谢产物，广泛污染小麦、大 麦、燕麦、玉米和啤酒等谷物和饲料[1-3] 。畜禽DON 中毒症状主要表现为拒食、呕吐、免疫 力下降、母畜不孕或流产以及死亡等，慢性蓄积会导致畜禽食欲减退、日增重下降、营养不 [4] 良、神经内分泌改变、免疫抑 等。特别是由于非中毒剂量的长期摄入引起的免疫抑制，致 使畜牧业每年蒙受巨大经济损失。据联合国粮农组织估算，全球每年约有 20% 的粮食作物 由于霉败变质而被弃用，由此造成的经济损失高达数千亿美元。另外DON 毒素已被证明与 人的急性胃肠道疾病有密切的关系，FDA 建议人食品中的DON 含量不应超过1000µg/kg[5] 。 为了解决农产品，饲料和食品中真菌毒素污染问题，人们早就提出了多种方案。目前国 [6] 内外较为普遍的去除真菌毒素的方法主要有物理吸附、化学处理和生物转化等 。物理吸附 主要是吸附一些有极性的真菌毒素。化学方法可以破坏大多数真菌毒素，但是由于其同时也 破坏营养成分和影响适口性，所以很少被应用于生产。生物转化或酶可将真菌毒素转化为无 害的代谢产物而使其灭活。该法不使饲料的营养成分丢失，不改变其适口性，因而被认为是 去除饲料中真菌毒素的最佳方法[7] 。笔者从土壤中分离到一株能利用脱氧雪腐镰刀菌烯醇为 唯一碳源生长，可以转化DON 的真菌，编号为A-DON 。本文主要报道该菌的分离，鉴定 和其相关转化效果。 1. 材料与方法 1.1 样本采集 分离菌株的土壤样品和瘤胃液分别采自江苏南京市郊区和本校试验动物 房。总共采集了15 个土壤样品和5 个瘤胃液样品。 1本课题得到国家自然科学基金面上项目、教育部博士点基金（20040307043）和江苏省科技 攻关项目（BE2004317）的资助。 -1- 1.2 生物转化菌的分离和纯化 分别取瘤胃液，土壤样品1mL 和1g 样品加入50mL 的含 有0.2 mg DON （Sigma，美国）的无机培养基（(NH ) SO 1.0g , K HP