产单核细胞李斯特菌的脉冲场凝胶电泳分型方法研究.pdfVIP

一46一 江苏农业科学2012年第加卷第1期 颜卫，焦新安，潘志明．等．产单植细胞李斯特苗的脉冲场凝胶电泳分型方法研究[J]江苏农业科学，2012，40(1)：46—48 产单核细胞李斯特菌的脉冲场凝胶电泳分型方法研究 颜卫1，焦新安2，潘志明2，耿士忠2，黄金林2 (1．江苏畜牧兽医职业技术学院，江苏泰州225300；2．扬州大学，江苏扬州225009) 摘要：建立产单核细胞李斯特菌的脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型方法，对单核细胞李斯特菌的PFGE技术进行优 化。以期获得条带亮度和清晰度都理想的脉冲图谱以及包含较多信息的分析结果；13株单核细胞李斯特菌经PFGE分 析获得菌株的遗传进化树和相似性距阵。本研究建立的PFGE分型方法，为单核细胞李斯特茵的溯源追踪提供了很 好的技术平台，对于其他革兰氏阳性菌PFGE分型方法的探索也具有重要的参考价值。 关键词：单核细胞；李斯特菌；脉冲场凝胶电泳；包埋 中图分类号：s852．6l文献标志码：A 文章编号：1002—1302(2012)叭一0046—02 产单核细胞李斯特菌(如‘州d瑚，Io州p萨榔，Lm)是一种为D啪．。=1．3。 人兽共患食源性病原菌，可引起以脑膜炎、脑炎、败血症为特 2．2酶切前包埋块的处理 ekc仃0一 (1)溶菌酶37℃孵育处理菌液10min；(2)低熔点琼脂 征的李斯特菌病。脉冲场凝胶电泳(pulse一6eldgel pho瑚is。PFGE)是近年发展起来的细菌分型方法，具有重复糖包埋细菌(图1)；(3)溶菌酶处理后的菌液与低熔点琼脂 性好、分辨率高、敏感性强等特点．已成为细菌亚分型的“金 糖等体积比混匀制取包埋块。 标准州”。本研究通过对参考菌株进行PFGE方法的探索，获 M I ： 得较为理想的脉冲图谱，并最终确定单核细胞李斯特菌脉冲 场分型的一系列最佳条件，为食源性疾病的溯源追踪提供技 212bo 术平台。 J“bo 115bn 1材料与方法 018h0 q70bD 1．1材料 92lbD 873b口 1．1．1 菌株 食品分离株M3061808、工 824bD 枷3061807、瑚3062503、M3032104、枷3062505、 工枷032103、M3061801、Lm0306250l、776hD L棚3061103和临床分离株NJll91、NJl579，均为江苏省人畜 l—sKG包埋单核细胞李斯特菌后的PFGE图谱；2—普 共患病重点实验室保存。 通低熔点琼脂糖包埋单核细胞李斯特菌后的PFGE罔谱 围l 2种琼脂糖分别包埋细菌后的PFGE图谱 1．1．2主要仪器、试剂脉冲场电泳仪器为cHEF—MAP- 2．3包埋块的清洗 PER(Bio—Rad)，Gls一1000凝胶成像系统，溶菌酶，PFcE用 Markero (1)预热的超纯水、TE各清洗2次，每次45fllin，清洗后 琼脂糖，蛋白酶K，限制性内切酶，PFGE 1．2方法