第五章 植物离体微繁.ppt

植物离体微繁的特点 1.繁殖速度快：它的高速度是以下三种因素构成的：①有较高的增殖倍数; ②较短的增殖周期；③周年生产。 2.经济效益高：占用空间小，生产效率高，省时、省工、节约土地。 3.保持植物种性； 4.繁殖各种珍稀、濒危、名贵、突变物种。 外植体的选择 3）外植体的年龄： ①植株的生理年龄越小，外植体的再生能力越强，培养成功的可能性越大。 ②同一植株上越接近基部的枝条，生理年龄越小。 4）取外植体的季节和时间： ①选取外植体的季节和时间，对培养材料的启动和培养至关重要。 ②一般在生长季—春夏。 5) 外植体的大小 外植体过大，不易灭菌，过小，不易成活。一般0.5-1cm；脱毒培养0.2-0.5cm。 外植体的灭菌 无菌的外植体材料是植物组织培养成功的重要前提与可靠保证，而消毒 则是获得无菌外植体的有效方法。取来的外植体需要经过仔细的表面灭菌处 理，外植体灭菌常用消毒剂。 消毒注意事项：1.正确选择消毒剂种类及浓度、消毒时间，减少组织的死亡. 2. 在用消毒剂对材料表面消毒后，必须用无菌水漂洗3次以上以除去残留杀 菌剂，但用酒精消毒时，则不必漂洗。3. 与消毒剂接触过的切面在转移至无 菌基质前需切除，因为消毒剂会阻碍植物细胞对基质中营养物质的吸收。 4. 在外植体污染严重时，应用流水漂洗1h以上或先种子培养得到无菌种苗， 然后用其各个部分建立组织培养。5.Hgcl2效果最好，但较难从外植体去除， 对人的伤害也最大，用后要用水冲洗至少5次。 外植体的接种和培养 外植体的接种—无菌操作 外植体表面灭菌—切取分离—无菌培养基 外植体的培养 光照、温度、湿度、培养基pH、气体调节 注意 无菌培养体系的建立需注意下面两个问题： 1.采样和表面灭菌；　　 2.首次接种污染率的估算与对策： 首次接种，小容器，多数量，尽 量分散，互相隔离，效果最好。 茎段培养过程 将经过表面消毒的茎段在无菌条件下，切成几厘米长带芽的节段， 接种在固体培养基上。经过培养后，茎段可直接发生不定芽，或先诱导 形成愈伤组织，再脱分化形成再生苗。把再生苗进行切割，转接到生根 培养基上培养，便可得到完整的小植株。 4）原球茎的发育 大部分兰花的培养属于这一类型。 原球茎特点: 缩短的、呈珠粒状的、由胚性细胞组成的、类似嫩茎 的器官。 原球茎是一种类胚组织，培养兰花的茎尖或腋芽可直接产生原球 茎，继而分化成植株，也可继代增殖为原球茎。 特点：受材料的局限性较大。 试管苗的移栽 试管苗的移栽要注意以下几点; 首先，要保持小苗的水分供需平衡。 第二，要选择恰当的种植介质，最要紧的是疏松透气，适宜的保水性， 容易灭菌处理，不利于杂菌滋生。常用的有粗粒状蛭石、珍珠岩、粗沙、炉 灰渣、谷壳(或谷壳灰)、锯木屑等，或者将它们以一定的比例混合使用。 第三，要防止菌类滋生。试管苗原来的环境是无菌的，种植出来以后难 以保持完全无菌，但应尽量不使菌类大量滋生，以利于试管苗成活。 第四，要注意一定的光、温条件。一般强度较高的慢射光较好。 第五，再生植株的鉴定：是指用细胞学或形态学等方法检查再生植株是 否有遗传变异。 试管苗的移栽基质 植物离体微繁过程 2.1.1 植物材料的影响 不同种类植物，同种植物不同品种，同一植物不同器官和不同 部位，增殖速率是不同的。一般是: 草本木本； 被子植物裸子植物； 年幼材料老年材料； 刚分离组织已继代的组织； 胚营养体组织； 芽胚状体愈伤组织。 2.1.2 植物离体分化过程类型的影响 2.1.2.1 无菌短枝型 又称节培法或微型扦插法，由单芽茎段增殖成苗。 特点：一次成苗，遗传性状稳定，培养过程简单，适用范围大，移栽容 易成活。 2.1.2.2 丛生芽增殖型 茎尖或初代培养的芽→发生腋芽→丛生芽。 特点：遗传性状稳定，茎尖培养，脱毒苗。 2.1.2.3 器官发生型 从植物叶片、子房、花药、胚珠、叶柄等诱导出愈伤组织；从愈伤组织 上诱导不定芽。 特点：可创造有益突变体，可能发生变异。 植物离体分化过程类型的影响 2.1.2.4 胚状体发生型 从植物叶片、子房、花药、胚珠、未成熟胚等诱导体细胞胚胎发生， 其发生和成苗类似合子胚或种子。 特点：胚状体具有数量多、结构稳定、易成苗和繁殖速度快的特点，有 变异。 2.1.2.5 原球茎型 原球茎是一种类胚