显色基质法定量检测止血材料细菌内毒素含量.pdfVIP

堕塑堕苎：!!!!：!!!! 垫塑堡查 显色基质法定量检测止血材料细菌内毒素含量 0) 王静。 中国药品生物制品检定所(10005宋天琦黄清泉 980411 摘要 目的：定量检测止血材料中细菌内毒素的含量； 止『血L无纺布：s一99 0．59／片 99 980508 方法：应用显色基质法定量测定样品中细菌内毒素的含 可溶性止血腔囊：s 10粒／袋 量{采用上海市医学化验所的鲎试剂盒，根据标准曲线 o．19／粒 查出相应的内毒紊浓度．再乘以稀释倍数；结果：四种止 以卜均为北京纺织科学研究所提供。 血材料细菌内毒素的含量分别为：止血纱布s 99 2方法 980122内毒束的含量为o．7Eu／ml；吸收性止血绫S2．1试剂的配制 9998031 2．1．1 6内毒索的含量为1，oEu／ml；止血无纺布s一 鲎试剂按标量加入o．4mol／I．Tns—Hcl·Mgh 999804n内毒素的含量为o．312sEu／ml；可溶性止血缓冲灌，轻轻混匀； 胶囊s毒索的含量为2．8Eu／m1；姑论：定2．1．2亚硝酸钠加入o．48nlol，L盐酸6．2m1混匀； 量捡测止血材料中的细菌内毒素其灵敏度、特异性和精 2．1．3氯基磺酸铰加入蒸馏水6．2m1混匀； 密度均高于凝腔法。 2．1．4萘己_二胺加入蒸馏水6．2ml混匀； 关键调显色基质法细菌内毒素鲎试荆 上述配制的试剂与鲎三肽一次用毕，不宜保存。 显色基质法是测定一种特殊底物中稀放出来的生 2．2标准品的配制 色团的方法。在内毒索与鲎试剂的连锁反应中生成一种 I芰国家标准品加入lml检查用水溶解即成 凝固酶．该凝固酶切开一种特殊底物使其释放生色团， 9000Eu／ml；取o．3mI标准液加2．7ml检查水即成 这种底物由一合成肽链通过其末端一f()()H与一半色 团连接而成。如果这个特殊底物是由肽链和对硝基苯胺 o．3m1加2．7ml检查水即成9Eu／ml；取o．3m1加2．4ml 连接而成。那么释放出来的对硝基苯胺经重氯化偶合反 5Eu／ 榆查水即成1Eu／m1‘取ImI加1ml检查水即成o 应后即可被测定，从而定量检测出止血材料中细菌内毒 mI}取1ml加1ml检查水即成0．25Eu／mh取】mI加lml 幕的舍量。 检查水即成o．125Eu／mlf取1ml加1ml检查水即成 目前各国药典收载的细菌内毒索定量测定方法有 0．06E。／ml；取1ml加lml检查水即成O．03Eu／m1； 两种：一种是浊度法，另一种是显色基质法·这两种方法 2．3样品的配制 都属于分光光度法。 o．59(一片)样品(止血纱布、吸收性、止血凌、I卜血 本文主要考察显色基质法定量检测止血材料细菌 无纺布)分别加50mI水溶解成lomg／ml，取lml加入 内毒素的含量。 4m1检查用水即成zmg／ml； 1材料和仪器处理 取o．59(5个胶囊)可溶性止血胶囊加入50m1水溶 1．1 lml、5ml刻度吸管；50卜l，100pl、500p1定量移液器 解成10mg／m1．取1m1加入4m1检查用水即成2mg／ml{ 及对应的吸头}50ml锥形瓶若干个‘ 2．4限值L的计