抗冷冻蛋白基因遗传转化草菇的研究.pdfVIP

卷 期 ! # 微 生 物 学 报 ’( )! 1’ ) # 年 月 $%% $ !#$ %’()(*(+$ ,-$ *+,-./-0 $%% !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 抗冷冻蛋白基因遗传转化草菇的研究 ， ， # $ # $ $ $ 郭丽琼 林俊芳 熊 盛 陈守才 # （华南农业大学食品学院生物工程系 广州 #%4!% ） $ （中国热带农业科学院热带作物生物技术国家重点实验室 海口 5##%#） 摘 要：采用H86IJH 技术从瑞典的北极云杉卷叶蛾幼虫中扩增出抗冷冻蛋白基因，利用基因枪法遗传转化草菇。 IJH 检测和K’.LM+- 杂交结果证明，抗冷冻蛋白基因已整合进草菇基因组。低温胁迫试验结果表明，转基因草菇具 有较强的耐低温能力。转基因草菇生物学特性观测结果显示，大多数草菇转化子的生长速率明显地慢于对照的宿 主菌株，多数转化子的菌丝也明显地比宿主菌丝细弱。转化子筛选结果表明，采用三轮的转化子筛选程序，即第一 轮在固体培养基上筛选、第二轮和第三轮在液体培养基中筛选，有利于获得真实转化子和淘汰假转化子。转基因 草菇一代低温胁迫结果证明，转基因草菇后代仍然具有较强的低温耐受能力，这说明转基因草菇的耐低温性能在 世代之间是稳定的。 关键词：草菇，抗冷冻蛋白基因，转化，基因枪法 中图分类号： ， 文献标识码： 文章编号： （ ） K44 N #2 O323 N34 P %%%#64$%3 $%% %#6%%236% 草菇是几种最重要的大规模栽培的食用菌之 存。 培养基：去皮马铃薯 ，葡萄糖 ，琼 IRP $%%F $%F 一，特别是在热带和南亚热带地区。草菇是典型的 脂 ，水定容至 。 培养基：去皮马铃薯 $%F #S IRKP 高温型食用菌，它可在 高温环境中生长良好， ，葡萄糖 ，磷酸二氢钾 ，硫酸镁 ，维生 !2Q $%%F $%F 2F #NF 但不耐 以下的低温。在 低温下，草菇菌丝 素 ，琼脂 ，水定容至 。 培 #% Q ! Q T# F U #%F $%F #S IRKT ［］ 会发生自溶而死亡，子实体会发软、液化和腐烂# 。 养基：去皮马铃薯 ，葡萄糖 ，磷酸二氢钾 ，