大肠杆菌感受态细胞保存条件的研究.pdfVIP

第 27 卷 第 6 期 华 　中　农 　业 　大 　学 　学 　报 Vol . 27 　No . 6 2008 年 　12 月 J ournal of Huazhong Agricult ural U niver sit y Dec . 2008 ,745～748 大肠杆菌感受态细胞保存条件的研究 唐颜苹 　王小媚 　何 　薇 　李晓华 ( 中南民族大学生命科学学院/ 生物技术国家民委重点实验室 ,武汉 430074) 摘要 　研究了保存时间、温度和抗冻剂对大肠杆菌感受态细胞保存的影响 。结果表明:在 4 ℃、- 40 ℃、 - 70 ℃条件下 ,大肠杆菌感受态细胞转化效率在保存前期随保存时间增加呈上升趋势 ,转化效率在第 1 天或第 7 天达到最大值 ,此后随保存时间增加而呈下降趋势 ;在保存前期 ,保存于 4 ℃的大肠杆菌感受态细胞转化效率 高于保存在 - 70 ℃、- 40 ℃的大肠杆菌感受态细胞的转化效率 ,在保存后期低于保存在 - 70 ℃、- 40 ℃的大肠 杆菌感受态细胞的转化效率 ;在相同保存温度和保存时间下 ,保存在甘油的大肠杆菌感受态细胞转化效率高于 保存在 DM SO 的大肠杆菌感受态细胞的转化效率 。 关键词 　大肠杆菌 ; 感受态细胞 ; 保存 ; 转化效率 ( ) 中图法分类号 　Q 78 　　文献标识码 　A 　　　文章编号 　1000242 1 2008 　　感受态细胞的制备和转化是分子生物学实验最 公司 。 基本 、最常用的操作技术之一 ,可用于重组质粒的转 ) ( ) 2 试剂和培养基 。二甲亚砜 DM SO 为 Sigma 化 、基因克隆以及基因文库构建等研究 。制备感受 公司产品;甘油和 CaCl 为上海国药产品;L A 和 LB 2 态细胞的方法很多 ,而 CaCl2 法是 目前实验室制备 培养基配制参照文献[ 10 ] 。 感受态细胞较为方便的方法之一 ,该方法是 Mandel 1. 2 　方 　法 和 Higa 发现用 CaCl2 处理的细菌细胞可被噬菌体 ) 1 大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 。参照文 [ 1] DN A 转染 后首次报道的。 献[ 1011]进行 。 感受态细胞的制备过程相当繁琐 , 既耗时又费 2) 大肠杆菌感受态细胞的保存 。新鲜制备的大 力 ,为了节约时间并减轻工作量 ,笔者尝试将制备好 肠杆菌感受态细胞分别加入终浓度为 20 %甘油或 的感受态细胞进行分装然后低温保存以备用 。目前 μ 20 % DM SO 作抗冻剂 , 每管分装 100 L , 分别于 对大肠杆菌感受态细胞的制备及转化能力的影响因 - 70 ℃、- 40 ℃和 4 ℃冰箱保存待用 。 素方面的研究比较成熟[26 ]