Eupenicillum+sp.E-UN41胞外产咪唑立宾发酵条件优化.pdfVIP

Eupenicillumsp．E—UN41胞外产咪唑立宾的发酵条件优化 张祝兰‘，任林英，唐文力，杨煌建 福建福州 (福建省微生物研究所福建省新药(微生物)筛选重点实验室 350007) 摘要：对前期筛选得到的咪唑立宾产生菌Eupenicillumsp．E．uN4l，通过单因素筛选结合正交试验进行发酵 同时对摇瓶条件下液体发酵的主要影响因子温度、转速、初始pH值等进行实验探讨，确定了最佳培养参 mV500 h，装液量50 ml，接种量2％，摇床转速250r／min，发酵温度28℃； 数：初始pH值7．0，种子菌龄48 最佳发酵时间为7d，其发酵效价相比对照提高38％。 关键词：正青霉菌，单因素试验，正交试验，发酵条件优化 新型免疫抑制剂昧唑立宾(Mizoribine,MZ)是1971年从真菌Eupenicillum 一种咪唑类核苷‘11。1984年获日本厚生省批准用于肾移植术后排异反应的预防及治疗狼疮性肾炎、类风湿 用于临床肾移植，取代硫唑嘌呤作为常规免疫抑制用药【4_5】。我国近年来也将其作为肾移植抗排斥药用于临 床，但是目前国内通过微生物生产MZ的研究报道甚少。为获得MZ的高效发酵培养条件，对课题组前期筛 选得到的MZ产生菌Eupenicillumsp．E-UN41进行摇瓶发酵培养基组成及发酵参数的优化研究，以期为MZ的 后续研究打下基础。 1材料与方法 1．1菌种 sp．E-UN41，由福建省微生物研究所提供。 正青霉菌Eupenicillum 1．2培养基 1)斜面培养基：马铃薯培养基(PDA)。 0．1， pH7．0· 3)发酵培养基：根据需要，由种子培养基添加一定量的不同碳源、氮源、磷源物质及无机盐组成。 4)对照发酵培养基(％)：参照张祝兰等㈣报道的培养基。 1．3培养方法 将保存的菌种Eupenicillum r／min条件 下培养48h的培养物作为种子液，转接入60ml／500ml三角瓶发酵培养基中，根据实验方案改变培养基及培 养条件进行发酵，测定发酵效价和菌体生长量。 1．4分析方法 省科技重点项目(No．2009R10003-3) ’通讯作者l Tel：86—591E-mail：jessylan9963@sina．COm 262 1)效价检测：参照张祝兰等【6】报道的方法，发酵液离心，上清液进行高效液相色谱(HPLC)检测。 效价为三次平均值，以相对值标示。 2)菌体生长量测定：取10 菌体在发酵液中的体积百分Lt(PaekedVolume，PMV)。 Mycelial 2结果与分析 2．1发酵培养基配方的筛选 2．1．1不同碳源的影响 以无碳源的发酵培养基，按3．0％的浓度分别添加可溶性淀粉、葡萄糖、甘油、糊精及麦芽糖等各种碳 源发酵E．UN41，以3．0％可溶性淀粉为碳源的发酵培养基产MZ的相对效价(RelativeTiter,RT，％)为100， 结果见表l。表明碳源的种类对MZ产量的影响比对菌体生长的影响大，添加可溶性淀粉、葡萄糖、甘油、 水平最高。因此选用可溶性淀粉作为碳源。 表1碳源对E．UN41生长及合成MZ的影响 1 Effectsofcarbonsourcesonthe ofE—UN41 MZ Table growth and production 2．1．2不同氮源的影响 用无氮源的3．O％可溶性淀粉发酵培养基，按2．5％的浓度分别添加黄豆粉、玉米桨粉、麸质粉、酵母 2。表明氮源的种类对MZ产量的影响比对菌体生长的影响大，添加黄豆粉、麸质粉、酵母粉、豆柏粉， E