病理组织切片的制作.doc

病理组织切片的制作 卢文丽方肇勤 （2007/01/04） 器材（按一小组，约4-6人） 眼科镊：直无勾10cm 、弯无勾10cm各5把； 组织镊；12.5cm 2把眼科剪：直尖10cm 4把解剖剪：cr/14，4把普通双面刀片：10片/盒×1盒染色架：5个染色缸：14-15个×3盒×2盒37度恒温箱：1个磨砂载玻片：50片/盒×盒盖玻片：100片/盒×盒广口瓶：30ml60ml×20个滴管及配套吸头：4个玻璃漏斗：φ90 3个玻璃搅棒：2支普通粗孔大张滤纸：20张φ90mm玻璃培养皿：4个毛笔：支烧杯：500ml 1000ml 各1个量筒：100ml、500 ml、1000 ml各1个组织切片机及配套刀片：4台生物切片石蜡：5盒，熔点：56-58℃电子天平：1台脱水篮：1-2个； 打火机、标签纸、铅笔各一，卷筒纸、乳胶手套口罩、医用纱布足量二．试剂 苦味酸（2.4.6-三硝基苯酚）：30g/瓶×1瓶； 37%~40%福尔马林液：500ml/瓶×1瓶； 冰醋酸：AR，500ml/瓶×1瓶；无水乙醇：AR，500ml/瓶×10瓶；二甲苯：AR，500ml/瓶×10瓶； 苏木色素（苏木精）：瓶； 酸性品红（曙红丫水溶）：25g/瓶×1瓶； 碘酸钠：AR，500g/瓶×1瓶；柠檬酸：AR，500/瓶×1瓶; 水合氯醛：AR250g/瓶×1瓶　 铵矾（ALNH4(SO4)2·12H2O）或钾矾（ALK(SO4)2·12H2O）：500g/瓶×1瓶 蛋白甘油（甘油/鸡蛋清=1/1）：50ml 中性树胶：100g/瓶×2瓶。若中性树胶过于粘稠，可与二甲苯按7/3的比例稀释。 蒸馏水：5000ml三．实验步骤 （一）固定液、染色液的配置 （1）Bouin氏液 苦味酸饱和水溶液 75ml 37%~40%福尔马林液 25ml 冰醋酸 5ml 苦味酸饱和溶液的浓度为100ml水中加1g苦味酸 （2）苏木精液 苏木精 1g蒸馏水 00 ml 铵矾或钾矾 0 g 碘酸钠 0.2g 柠檬酸 1g 水合氯醛 50 g 将苏木精溶于蒸馏水矾矾溶解后， （3） 曙红 0.5~1g 蒸馏水 100ml 混匀后过滤 （二）组织取材 取舌、胸腺、脾、胃、肝、十二指肠等6种脏器。（三）固定与修块 上午：取组织块入Bouin氏液中，组织块的直径应小于7mm。 下午：修块，用双面刀片将组织块修剪成3~5mm3大小。 若中午取材，则晚上修快。具体修块方法如下表： 表 舌等6种组织修块及包埋方法 组织名称 修块方法 包埋方法 舌 在舌根隆起靠舌尖侧切断，分为四段，取前2/4段 舌体近舌尖部朝下 肝 截取4mm3大小方形块 任一截面朝下 脾 截取中间4mm3大小方形块 截断面朝下 胃 截取幽门部朝上长约5mm的胃 胃窦部宽口朝下 十二指肠 靠近截取长约5mm的肠 截断面朝下 胸腺 截取5mm3大小方形块 任一截面朝下 （四）脱水与透明 在以下过程，要求经常晃动组织块，以保证组织块可以充分地与乙醇或二甲苯接触，在每一步骤之后，要充分滤干组织块，一般用筒纸吸干组织块上的液体，以免影响其他液体的浓度，但要防止组织块干燥。全过程约需要4.5h（270min）。 1．75%乙醇 　 50min 2．85%乙醇 50min 3．95%乙醇 （I） 30min 4．95%乙醇 （II） 30min 5．100%乙醇（I） 30min 6．100%乙醇（II） 30min 7 1/2 二甲苯（乙醇与二甲苯等体积） min 8．二甲苯（I） 20min 9．二甲苯（II） 10min（依据透明效果而定） 透明效果的判断：如组织块颜色加深透明，二甲苯溶液颜色透明，即表明脱水效果很好；如脱水不好，二甲苯溶液颜色会变混浊。使用过的酒精或二甲苯倒入烧杯里以便回收。 （五）浸蜡、包埋与修蜡块 1．浸蜡：可在脱水与透明进行时，将60℃恒温，使烧杯石蜡充分溶解，待脱水与透明结束后，可将组织块转入充分溶解的石蜡里，于60℃恒温放置120分钟。2．包埋：包埋有多种器具，比较简洁廉价的方法是采用纸盒。可在浸蜡的同时将纸