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低温胁迫对玉米叶片抗寒性的影响1.doc
低温胁迫对玉米叶片抗寒性的影响
生科1301 郑英策
(东北农业大学生命科学学院 黑龙江哈尔滨150030)
摘要:对两个玉米品种(九龙、利禾)进行4℃低温胁迫处理12h和24h,测量其叶绿素含量、过氧化物酶活性和电导率。结果表明,随低温处理时间增加,九龙的叶绿素含量先降低后上升;利禾叶绿素含量先升高后降低;九龙过氧化氢酶活性升高;利禾过氧化氢酶活性降低;两种伤害率体现出在12h时最大,而在24h是减小的现象。实验结果显示,两种不同的玉米在低温胁迫是的反应是不同的,其具体成因还需讨论。
关键词:玉米 抗寒性 低温胁迫
玉米(ZeamaysL)属于禾本科玉蜀黍族玉蜀黍属玉米种,学名玉蜀黍,俗称棒子、苞米、苞谷,原产于拉丁美洲的墨西哥和秘鲁沿安第斯山麓一带。哥伦布发现美洲大陆后,在第二次归程(1499年)中,把玉米带到西班牙。随着世界航海业的发展,玉米逐渐传到了世界各地,成为最重要的粮食作物之一。
玉米是喜温作物,在生长早期对低温特别敏感,品种对低温冷害所具有的抵抗性或忍耐性被称为耐寒性。玉米生长的最适宜温度30℃~35℃,当温度低于10℃植株生长明显缓慢,6℃~8℃时停止生长,温度更低时细胞和组织产生不可逆的损害。芽期冷害引起出苗率降低、出苗迟缓、成苗率减少;苗期遭遇低温引起幼苗萎蔫,甚至死亡,导致巨大的产量损失[1~2]
1.材料与方法
1.1材料:
九龙,利禾两种玉米种子,由东北农业大学生命科学学院植物生理教研室提供。
1.2方法
1.2.1玉米幼苗的培养
取九龙,利禾玉米种子各300粒左右进行消毒,用蒸馏水将玉米种子洗净,在75%乙醇中消毒15s,浸种催芽处理12h后,用蒸馏水洗三次,洗去种子表面抑制生长的物质,进行沙培,将沙子平铺在培养盘上,用喷壶浇适当的完全营养液。将种子放在沙子上,种脐向上,种子间距离适当。种子上覆盖适当的沙子,约1cm厚,保证沙子湿度适当,培养条件为20℃,浇完全营养液,使生长健康。当植物长出四片真叶时进行试验,低温胁迫玉米幼苗并测定其3项生理指标。
1.2.2处理方法
将每个品种的供试材料分为三组,一组于原处继续生长,一组移至4℃冰柜低温胁迫12h,另一组移至4℃冰柜进行低温处理24h,分别作为常温对照和低温处理处取材,测定其生理生化指标。
1.2.3生理指标的测定
叶绿素含量测定
1.称取剪好的新鲜玉米叶片0.2g,放入研钵中,加入少量石英砂与碳酸钙及8ml提取液,研磨成匀浆,室温静置3—5min后转到10ml离心管中,4000r/min离心5min,取上清液倒入容量瓶定容至25ml。
2.测定在649nm,665nm下吸光度。
3.计算:
Ca=13.95*A665-6.88*A649
Cb=24.96*A665-7.32*A665
CT=Ca+Cb
叶绿体色素含量(mg/g)=CT*V*N/W
式中:CT—色素浓度(mg/ml)
V—提取液体积(ml)
N—植物组织鲜重(g)
W—稀释倍数
2)过氧化物酶活性测定
1.称取0.5g叶片,剪碎,放入研钵中,加适量磷酸缓冲液(pH5.5)研磨成匀浆,将匀浆倒入离心管,4000rpm,离心10min,取上清液,定容至10ml。
2.酶活性测定的反应体系包括2.9ml0.05M磷酸缓冲液;1.0ml2%H2O2;1.0ml0.05愈创木酚和0.1ml酶液。用加热煮沸5min的酶液作对照组,反应体系加入酶液后,立即于37℃水浴中保温15min,并加入2.0ml20%的三氯乙酸终止反应,在470nm波长下测吸光度。
3.计算:
过氧化物酶活性=(A470*VT)(0.01*W*VS*t)
A470—反应时间内吸光度变化
W—样品鲜重
t—反应时间
VT—提取酶液总体积
Vs—测定取用酶液体积
植物细胞质膜透性
1.取0.5g叶片,剪碎。
2.每瓶各加10ml去离子水,于针筒中抽去细胞间空气,水渗入细胞间隙,叶片呈半透明状,沉入水下,室温放置10min
3.将各瓶充分摇匀,用电导率仪测初电导值(s1)
4.将各瓶在微波炉加热30s,杀死植物组织,取出称量瓶,冷却至室温,,摇匀,测最终电导值(s2)
5.计算:
相对电导率(L)=(S1-S0)/(S2-S0)
伤害率(%)=(L1-Lck)/(1-Lck)
S0—蒸馏水电导率
S1—煮沸前电导率
S2—煮沸后电导率
L1—低温处理时叶片的相对电导率
Lck—对照(室温下)叶片的相对电导率
2结果与分析
2.1低温胁迫对叶绿素含量的影响
初始数据:
表一叶绿素吸光值
初始数据 九龙 利禾 叶绿素吸光值 A649 A665 A649 A665 0h 0.444 1.034 0.439 1.042 0.442 1.048 0.439 1.046 0.453
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