PRRSV广东变异株分离及NSP2部分序列分析.pdfVIP

动物医学进展-2011，32(3)：26—3l ProgressinVeterinaryM edicine PRRSV广东变异株分离及 NSP2部分序列分析 黄 元 ，禹思宇。，宣 华 ，向 华 (1．广东省农业科学院兽医研究所 ，广东省兽医公共卫生实验室，广东广州 510640； 2．南京农业大学动物医学院。江苏南京 210095) 摘 要：2006年以来，高致病性猪繁殖与呼吸综合征在我国造成 了巨大的经济损失。位于NSP2基 因 上的30个氨基酸的缺失已成为区分我国2006年以来的PRRSV 高致病性毒株和 2005年以前的经典流行 毒株的特异性标记。本试验在广东省分离到一个新型的PRRSV毒株 BL2，其 NSP2基 因540位～563住 (相对于VR2332ORFla)发生 24个氨基酸序列的缺失，该缺失位于高致病性株的缺失区域 内，但缺失长度 小于高致病性株 。国内外文献未曾报道过类似的突变。以NSP2部分序列构建系统进化树表明，与该毒株 同源性最高的是我国2005年分离的经典毒株 SHB(91．5 )，同时该毒株与我 国2006年后流行的高致病性 毒株也有较高的同源性 (89．9 ～91．3 )。动物回归试验表明，该毒株显示高致病性。 关键词：猪繁殖与呼吸综合征；新型变异株 ；NSP2；序列分析 中国分类号 ：S852．659．6 文献标识码 ：A 文章编号 ：1007—5038(2011)03—0026-06 猪繁殖与呼吸综合征 (Porcinereproductiveand 此有学者推测，高致病性 PRRSV可能是在选择性 respiratorysyndrome，PRRS)也称猪蓝耳病 ，是 由 压力下由经典株变异而来 ]。然而，这 3O个氨基酸 猪繁殖与呼吸综合征病毒 (PRRSV)引起的一种严 的缺失性突变的来源仍然不清楚 。 重危害养猪业的病毒性传染病 ，在临床上主要表现 本文在广东某猪场分离到一株新型的PRRSV 为妊娠母猪的繁殖障碍以及各种年龄猪的呼吸系统 毒株，与经典毒株相 比，该毒株在 NSP2位点存在24 疾病n]。PRRS于 1987年在美国首次发现，随后在 个氨基酸的缺失性突变，该缺失与 2006年来的高致 全世界广泛流行，我 国于 1996年由郭宝清[2首次分 病性株的缺失发生在 同一位置 ，但缺失长度较小。 离到该病病原。自从 20世纪 8O年代 以来 ，PRRS 此毒株在PRRSV遗传进化上的意义值得研究 。 几乎已经传播到世界上所有养猪的国家 ，造成持续 1 材料与方法 性的经济损失 ，严重危害世界养猪业的发展。 1．1 材料 2006年 ，我国出现了以猪群高热、皮肤发红、神 1．1．1 毒株 PRRSV广东株 ，命名为 BL2，本实验 经症状 ，发病率和死亡率极高为特征的疫情，称为 室从广东某猪场分离。 “猪高热综合征”。该疫情蔓延至全国20多个省市 1．1．2 细胞 与 茵株 Mark145细胞 和 E． ． 自治区，造成了巨大的经济损失[3]。我国学者研究 DH5a由本实验室保存。 证实，2006年以来的高致病性PRRSV是引起 “猪高 1．1．3 试验用动物 约 5周龄三元杂交猪 2头，试 热综合征”的主要病原。此高致病性PRRSV毒株 验前检测 PRRSV抗体为阴性。 与2005年以前我国流行的PRRSV经典株有很大 1．1．4 试剂 RNA纯化试剂 TRIzolReagents为 区别。致病性强 ，不仅使仔猪发病 ，而且使成年猪发 Invitrogen公司产 品。反转录酶 M—MLV、ExTaq 病 ；病程短，一般病程为 5d～2Od，常常在数天内导 DNA聚合酶和 T载体连接试剂盒 DNA Ligation 致猪只死亡，死亡率极高。遗传进化分析发现 ，高致 KitVer2．0为宝生物工程 (大连)有 限公司产品。 病 PRRSVNSP2蛋 白的 482位、5