3章食品检验分析方法4.4节液相色谱..ppt

一、概述： 1、无本质区别 2、高效液相色谱具有以下特点*（与气相色谱比较） 二、高效液相色谱仪 流程： 分析前，选择适当的色谱柱和流动相； 开泵，冲洗柱子，待柱子达到平衡且基线平直后； 用微量注射器把样品注入进样口，流动相把试样带入色谱柱进行分离，分离后的组分依次流入检测器的流通池，最后和洗脱液一起排入流出物收集器。 当有样品组分流过流通池时，检测器把组分浓度转变成电信号，经过放大，用记录器记录下来就得到色谱图。 色谱图是定性、定量和评价柱效高低的依据。 1、高压输液泵 高压输液泵要求： 流量恒定、无脉动、有较大的调节范围； 能抗溶剂的腐蚀； 有较高的输出压力； 泵的死体积要小，便于更换溶剂和梯度洗提。 (1) 注射式螺杆泵 (2) 气动放大泵 (3) 机械往复泵 由电动机带动凸轮(或偏心轮)转动，再用凸轮驱动一活塞杆往复运动。 活塞杆在液缸里往复运动，从而定期地将储存在液缸里的液体以高压输出。 改变电动机的转速，就可调节输出液的流量；隔膜式往复泵的工作原理与柱塞式往复泵类似，只是与液体接触的不是柱塞，而是弹性隔膜。 特点：液缸的体积小(小于1mL)，换液和清洗方便，适用于外梯度洗提。 缺点：但是输出液有明显脉动，需用多头泵或者外接压力脉动缓冲器使压力平稳。 2、梯度洗提装置* 梯度洗提： 通过梯度程序控制系统控制泵的动作，把两种或两种以上极性不同的溶剂，按预先设定的程序和比例混合，使其产生不同形式的梯度，再经高压泵供给柱子来实现，这样连续改变载液的成分和极性，能提高分析速度和分离效果。 3、进样装置 (1) 注射器进样（最常用） (2) 六通阀进样 高压六通阀=阀芯+阀体+定量管。 进样：样品先注入定量管里，通过手柄旋转阀芯，使定量管两端接入输液系统，样品由载液带入色谱柱中。 特点：进样量由选定的定量管而固定，重现性好，能耐200kg/cm2的高压。 4、色谱柱 （１）材料： 通常用不锈钢，内壁要抛光才能使用（当柱压不超过70kg/cm2时，也可以用厚壁玻璃或石英玻璃管柱）。 （２）长度： 柱内径2～6mm；柱长10～50cm；一般为直形柱。 （３）填充方法： 湿法装柱： 配匀浆剂：常用二氧六环和四氯化碳，或四氯乙烯和四溴乙烷等溶剂，配成密度与固定相相似的混合液为匀浆剂。 调固入罐：用匀浆剂把固定相调成均匀的、无明显结块的半透明匀浆，脱气后装入匀浆罐中。 顶替液置换： 开动高压泵，打开放空阀，待顶替液从放空阀出口流出时，即关闭阀门。 调节高压泵，使压力达到300～400kg/cm2。打开三通阀，顶替液便迅速将匀浆顶入色谱柱中，匀浆剂，顶替液通过柱下端的筛板，流人废液缸。 当压力下降到100～200kg/cm2时，说明匀浆液已被顶替液置换，柱子已装填完毕，但不能马上关掉高压泵，需要逐渐降低压力，匀速降至常压后停泵，卸下柱子，装在进样器上即可。 选定顶替液 匀浆剂及顶替液应根据固定相的性质选定，并进行脱水处理。一般情况： 硅胶、正相键合固定相：用己烷作顶替液； 反相键合相，离子交换树脂：用甲醇、丙酮作顶替液。 5、检测器 检测器：用于连续监测色谱柱流出物的成分。 理想检测器：应具有灵敏度高、重现性好、响应快、线性范围宽、适应范围广、对流量和温度的变化都不敏感。 目前应用：有紫外、折光、电导、荧光、电容、极谱等十多种检测器。 (1) 紫外吸收检测器 特点*： 不易受影响：温度和载液流速波动（广泛应用）； 非通用检测器：被测物质必须能吸收紫外线，或转化以后能吸收紫外线的物质。 特点*： 一种通用检测器。它可连续监测参比池与测量池之间折射率之差，能检测出μg/mL的被测组分。 一般不能采用梯度洗提，因为洗脱液组成的任何改变都将有明显的响应。 分类： 类型：偏转式检测器和反射式检测器； 偏转式折光检测器的基本原理： 　当介质中成分发生变化时，其光的折射率随之发生变化，如入射角不变，则光的偏转角是介质中成分变化的函数。 　因此，可以利用折射角偏转值的大小便可测得试样的浓度。 三、高效液相色谱法的应用 1、在食品分析中的应用 (1) 食品营养成分分析： 　　蛋白质、氨基酸、糖类、色素、维生素、香料、有机酸（邻苯二甲酸、柠檬酸、苹果酸等）、有机胺、矿物质等； (2) 食品添加剂分析： 　　甜味剂、防腐剂、着色剂（合成色素如柠檬黄、苋菜红、靛蓝、胭脂红、日落黄、亮蓝等）、抗氧化剂等； (3) 食品污染物分析： 　　霉菌毒素（黄曲霉毒素、黄杆菌毒素、大肠杆菌毒素等）、微量元素、多环芳烃等。 2、在环境分析中的应用 环芳烃（特别是稠环芳烃）、农药（如氨基甲酸脂类，反相色谱）残留等。 3、在生命科学中的应用 HPLC技术目前已成为生物化学家和医