中药的含量测定.ppt

第四章 中药的含量测定 第一节 含量测定的目的与意义 中药的含量测定与化药有很大区别 中药组成复杂，产生疗效的不是某单一成分，检测任何一种活性成分均不能反映中药的整体疗效。 但是借鉴化药质量控制模式，测定某一味药味的有效成分、活性成分、指标性成分的含量的方法，对于控制中药质量起着不可替代的重要作用。 通过测定中药中有效成分、毒性成分或某些指标性成分的含量来衡量其制剂工艺的稳定性和中药材的质量优劣，以保证中药的质量，达到临床用药安全、有效的目的。 第二节 含量测定样品的处理 样品处理的主要作用有： 将被测成分有效地从样品中释放出来，并制成便于分析测定的稳定试样。 除去杂质、纯化样品，以提高分析方法的重现性和准确度。 富集浓缩或进行衍生化，以测定低含量被测成分。衍生化不仅可提高检测器的灵敏度，还可以提高方法的选择性。 使试样的形式及所用溶剂符合分析测定的要求。 最新进展 GC 快速 微型 联用 多维 4、检测器 用于分析微量脂质、核酸、生物胺等 Pg级(10-12) ①高选择性、高灵敏度的新型检测器. ②设备简单,自身发光,无需光源,价格便宜 化学发光检测器(CLD) 尤其适合于糖类的检测 10-8g/ml ①属通用型检测器,利用组分与流动相折射率之差进行检测. ②稳定性好,操作方便.③灵敏度低,受环境温度、流动相组成等波动的影响大,不适合梯度洗脱 示差折光检测器(RID) 适用生物胺、酚、羰基化合物、巯基化合物等 1×10-12g/ml 用于能氧化、还原的有机物质的检测 电化学检测器(ECD) 5、HPLC前处理 （1）流动相的处理 ①溶剂的纯化 选择专供色谱分析用的“色谱纯”溶剂，分析纯或优级纯溶剂在很多情况下也可满足色谱分析的要求。由于不同的色谱柱和检测方法对溶剂的要求不同，有时需进行除去紫外杂质、脱水、重蒸等纯化操作。水一般采用石英系统二次蒸馏水。 第三节 常用定量分析方法 ②流动相脱气 HPLC所用的流动相必须预先除去其中的空气，习称脱气，一般在临用前对流动相进行脱气，常用的脱气法有超声波振荡脱气、惰性气体（He）鼓泡吹扫脱气、抽真空、加热法。 ③过滤 过滤是为了防止不溶物堵塞流路和色谱柱入口处的微孔垫片，因此应预先除去流动相中的任何固体微粒。流动相最好在玻璃容器内蒸馏，而常用的方法是过滤，采用0.45μm以下微孔滤膜过滤。 滤膜分有机溶剂专用和水溶液专用两种。 第三节 常用定量分析方法 第三节 常用定量分析方法 （2）样品的处理 HPLC分析前需对样品进行预处理，以便将待测物质有效地从样品基质中释放出来，使样品的形式及所用溶剂符合HPLC的要求。 ①待测组分的提取 ②溶剂的挥发(浓缩） ③滤过 样品溶液进样前，需用滤膜抽滤或针头滤器过滤，以有效除去样品溶液中的悬浮物或部分大分子杂质。 第三节 常用定量分析方法 正相色谱:流动相极性小于固定相极性的分配色谱法，主要用于极性物质的分离测定； 反相色谱:流动相极性大于固定相极性的分配色谱法，主要用于非极性、中等极性物质的分离测定 第三节 常用定量分析方法 化学键合相是将固定液的官能团键合在载体上所形成的固定相。 具有化学性能稳定，热稳定性好，一般在pH2-8范围的溶液中不变质，使用过程不流失，载样量大，适于梯度洗脱等特点，已广泛用于正相与反相色谱，离子抑制色谱，离子对色谱。 药典中HPLC法所采用的固定相均为化学键合相。以化学键合相为固定相的色谱法称为化学键合相色谱法. 现就中药分析中最常用的键合相色谱法作一介绍。 第三节 常用定量分析方法 （1）反相键合相色谱法 反相键合相色谱法是现代液相色谱中应用最为广泛的方法，占整个HPLC应用的80%左右。 反相色谱法一般采用非极性键合相，十八烷基键合相（简称ODS或C18）是最常用的非极性固定相，对于各种类型的化合物都有较强的适应能力； 流动相通常以水为基础溶剂，再加入一定量能与水互溶的极性调整剂，常用的有甲醇-水、乙腈-水系统。 极性调整剂的性质及其与水的混合比例对溶质的保留值和分离选择性有显著影响， 流动相的极性增大，洗脱能力降低，溶质的k增大，tR增大；反之，k与tR减小。调整流动相的极性，可控制k值在所要求的范围内（k=1-10），对于结构类似的组分，极性大的组分先出柱。 第三节 常用定量分析方法 （2）正相键合相色谱法 正相键合相色谱法的应用不如反相色谱法普及，主要用于分离分析溶于有机溶剂的极性及中等极性的分子型物质。氰基（-CN）、氨基（-NH2）和二醇基（DIOL）键