中药化学2.2色谱分离技术.ppt

2.2 　色谱分离技术 2.2.1 　必备知识 概念 　　 　色谱法又称层析法。是一种现代的物理化学分离、分析法。 　 　　　一些基本母核相同，官能团略有不同的化合物，一般的分离方法（萃取法、结晶法、沉淀法）难以分离时，采用层析法往往能得到较好的效果。 分类 按色谱原理分 1、? 吸附色谱：利用吸附剂对被分离成分吸附能力的不同进行分离。 2、? 分配色谱：利用被分离成分在两种互不相溶的溶剂中分配系数的不同进行分离。 3、? 离子交换色谱：利用被分离成分对离子交换剂亲和力的不同进行分离。 4、? 凝胶过滤色谱：利用凝胶对分子大小不同成分的阻滞作用不同进行分离。 按操作形式分类 平面色谱——薄层色谱（TLC）、纸色谱（PC） 柱色谱（CC）——吸附柱色谱、分配柱色谱、 离子交换柱色谱、凝胶柱色谱等 毛细管电泳色谱 按流动相的不同分类 液相色谱（LC）：液-固色谱（LSC） 液-液色谱（LLC） 气相色谱（GC）：气-固色谱（GSC） 气-液色谱(GLC) 超临界流体色谱（SFC） 色谱法的发展 仪器化 仪表化 自动化 高速化 联用技术 2.2.2　吸附色谱 　一、原理 　　　利用吸附剂对样品中各成分吸附能力不同，及洗脱剂或展开剂对它们的解吸附能力的不同，使各成分达到分离。 　　　吸附作用主要由于物体表面作用力、氢键络合、静电引力、范德华力等产生。 　　　吸附强度决定于吸附剂的吸附能力，还受被吸附成分的性质影响，更与展开剂的性质有关。 吸附剂对被分离成分的吸附能力越强，被分离成分吸附得越牢固，在色谱中移动的速度就越慢，反之移动的就快。 如果被分离物质的极性较大，可选用活度较低的吸附剂和极性较大的流动相；如果被分离物质的极性较小，可选用活度较高的吸附剂和极性较小的流动相。 二、吸附色谱基本构成要素 　三要素：吸附剂 　　　　　展开剂（洗脱剂） 　　　　　被分离成分 　　　　　　　　 　　　　　 （一）吸附剂 1、基本要求 　　　颗粒细致、大小均匀（亦即有较大的表面积和适当的吸附活性）； 　　　不能与样品组分、样品溶剂、展开剂发生化学反应； 　　　更不能与溶剂及展开剂发生溶解。 （一）吸附剂 2、种类 　　最常用的吸附剂是氧化铝、硅胶和聚酰胺。 　　另外，市场上还有氧化镁、硅酸镁、碳酸镁、硅藻土、活性炭等。 　　只有活性炭是亲脂性吸附剂，其余均是亲水性吸附剂。它们对水和极性大的化合物吸附能力强。 （一）吸附剂 3、吸附能力 　　亲水性吸附剂：对极性大的化合物吸附能 力强。吸附能力与其自身的含水量有关。 　　含水越多，吸附活性越小，吸附能力越小。 所以必须加热活化除去水分。 亲脂性吸附剂：对极性小的化合物吸附能力强。 影响亲水性吸附剂吸附力的主要因素——含水量 ①含水量多少称“活度”，用“级”表示（有5极），关系是 含水量↑→活度↑→级别↑→吸附力↓→活性↓ ②加热除去吸附剂中水分使吸附剂吸附能力增强活性增高的操作称“活化”。 ③在吸附剂中加入一定量的水分使吸附剂吸附能力降低活性减低的操作称“去活化”。 （一）吸附剂 4、常用的吸附剂 （1）硅胶SiO2?xH2O 　　　多孔性的硅氧烷交链结构，极性吸附剂，吸附性较氧化铝稍低，既适于分离亲水性成分，又可用于分离亲脂性成分。 　　　其吸附作用的强弱取决于游离硅醇基的数目，也与含水量有关，含水量达17％以上，则失去吸附性，所以需110℃活化30分钟。 （一）吸附剂 　　　注意温度超过150 ℃则游离硅醇基之间脱水形成硅氧醚结构丧失游离硅醇基的吸附能力。 　　　为酸性吸附剂适于分离中性或酸性成分。 常用硅胶： 硅胶H（不含黏合剂） 硅胶G（含黏合剂） 硅胶GF254(含煅石膏，另含有一种无机荧光剂)。硅胶GF254nm紫外光下呈强烈黄绿色荧光背景，在荧光背景下通过紫外光照射成分斑点为暗斑，常用于一般显色手段不易显色的成分的分离。 （一）吸附剂 （2）氧化铝Al2O3： 是吸附性较强的极性吸附剂，尤其对亲水 性较强的成分具较强的吸附作用（相似相 溶原理），适用于亲水性成分的分离。 400°C左右加热6h可得Ⅰ～Ⅱ级的氧化铝　　 分碱性、中性、酸性三种。 （一）吸附剂 中性氧化铝分离：中性成分、酸碱不稳定成分。 　　　　如：醛、酮、萜、生物碱、皂苷 　 碱性氧化铝分离：碱性成分、中性成分。 　　　　如：生