实验三 大肠杆菌生长曲线的测定.ppt

实验三 大肠杆菌生长曲线的测定 石陆娥 shilue@126.com 实验目的 1.了解分批培养时微生物生长曲线形成的原理及各时期的主要特点。 2.学习比浊法测量细菌数量的方法。 实验原理 将一定量细菌接种到一定体积的新鲜培养基中，在适宜的条件下培养，定时测定培养液中微生物的生长量（吸光度或活菌数），以生长量为纵坐标，生长时间为横坐标绘制的曲线就是生长曲线，它反映了微生物在一定环境条件下的群体生长规律。依据生长速率的不同，一般可把生长曲线分为延迟期、对数期、稳定期和衰亡期四个时期。不同的微生物有不同的生长曲线，同一种微生物在不同的培养条件下，其生长曲线也不一样。因此，测定微生物的生长曲线对于了解和掌握微生物的生长规律是很有帮助的。　　测定微生物生长曲线的方法很多，有血球计数法、平板菌落计数法、称重法、比浊法等。本实验采用比浊法测定，由于微生物悬液的浓度与混浊度成正比，因此，可利用光电比色计测定菌悬液的光密度来推知菌液的浓度，并将所测得的光密度值（OD值）与其对应的培养时间作图，即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线。 实验器材 1.菌种 重组大肠杆菌 2.培养基 LB 液体培养基（胰蛋白胨10g/L 酵母提取物 5g/L 氯化钠5g/L） 3.器材 紫外分光光度计，数控超级恒温槽，恒温振荡器，立式压力蒸汽灭菌器，生化培养箱，电子天平，恒温培养摇床，医用型洁净工作台，发酵罐等 实验步骤 1.生长曲线的测定 （1）种子培养基、发酵培养基的配制； （2）培养基的灭菌（121℃,20min,压力0.1Mpa）； （3）接种:按（0.1%，0.2%，0.3%，0.4%，0.5%，0.6%， 0.7%，0.8%，0.9%，1.0%，2%，5%）的接种量从种 子培养基接入发酵培养基；（每组两个不同的接种 量）； （4）在合适的条件下进行发酵（温度37℃，转速200rpm）； （5）间隔0、2、3、4、5、6、7、8、24小时取样3ml测OD值 （595nm）； （6）以培养时间为横坐标，吸光度为纵坐标，作 生长曲线,同时绘制不同接种量对生长曲线的影响。 思考题 1.何谓生长曲线，接种量对生长曲线有何影响？ 2.论述测定生长曲线与产物形成曲线的必要性。 *