EGFP和CMDil示踪骨髓间充质干细胞构建组织工程骨的体内研究.pdfVIP

406 中国美容医学 2012 年 3 月第 21 卷第 3 期 Chinese Journal of Aesthetic Medicine.Mar.2012.Vol.21.No.3 ·论著· EGFP 和 CM- Dil 示踪骨髓间充质干细胞构建组织工程骨的体内研究 武京国，谢方南，马慧雨，王 黔，曹谊林， 肖 苒 （北京协和医学院·中国医学科学院·整形外科医院研究中心 北京 100144） [摘要] 目的：应用增强型绿色荧光蛋 白（Enhanceddgreendfluorescentdprotein ，EGFP ）和CM-Dil 标记技术，观察组织工程骨在 体内形成过程中种子细胞的变化和转归。 方法： 分别用 EGFP 慢病毒表达和 CM-Dil 染料的方法标记比格犬骨髓间充质干细胞 （Bonedmesenchymaldstemdcells,dBMSCs ），MTT 法检测标记细胞的体外增殖能力。BMSCs 接种珊瑚支架体外成骨诱导 7 天后，将 未标记组、EGFP 组和 CM-Dil 组分别植入裸鼠背部皮下 ， 空白支架作为阴性对照。 术后 4、8、12 周取材，HE 染色观察成骨情况， EGFP 组采用 GFP 免疫组化、CM-Dil 组冰冻切片荧光显微镜下示踪 BMSCs 在体内的变化。 结果： 两种标记技术能高效标记 BMSCs ，标记前后细胞的体外增殖无显著性差异（P0.05）。 细胞- 支架复合物植入体内 12 周后有新生骨形成，标记细胞数量随 时间延长而逐渐减少，12 周后仍显示有部分标记细胞存活。结论：EGFP 和 CM-Dil 可用于示踪组织工程种子细胞，通过示踪说明 BMSCs 在体内组织工程骨成骨过程中发挥了重要作用。 [关键词]EGFP；CM-Dil；骨髓间充质干细胞；示踪；组织工程骨 [中图分类号]Q813.1ddR318dd [文献标识码]Ad1[文章编号]1008-6455（2012）03-0406-04 The in vivo study of tissue engineered bone constructed with EGFP and CM-Dil labeled BMSCs WU Jing-guo,XIE Fang-nan,MA Hui-yu,WANG Qian,CAO Yi-lin,XIAO Ran (Research Center of Plastic Surgery Hospital,Chinese Academy of Medical Sciences, Peking Union Medical College, Beijing 100144,China) Abstract: Objective To observe the effect of BMSCs in fabricating tissue engineering bone in vivo using EGFP and CM -Dil labeling technology. Methods BMSCs isolated from Beagle Dogs were labeled using EGFP and CM -Dil separately and the proliferation abilities were analyzed by MTT assay. BMSCs were seeded onto the coral scaffolds and cultured in the osteogenic medium for 7 days.Then the BMSCs/Coral constructs were implanted into the nude mices subcutaneously