HMBA对人成骨肉瘤MG63细胞形态结构和终末分化指标表达的影响.pdfVIP

第 46卷 第 6期 厦门大学学报 (自然科学版) Vo1．46 No．6 2007年 11月 JournalofXiamenUniversity(NaturalScience) NOV．2007 HMBA对人成骨肉瘤 MG-63细胞形态结构和 终 末 分 化 指 标 表 达 的 影 响 李祺福 ，马宗源，唐 剑 (厦门大学生命科学学院 细胞生物学研究室 。福建 厦门 361005) 摘要 ：应用环六亚甲基双乙酰胺处理人成骨肉瘤MG-63细胞，观察MG．-63细胞处理前后形态与超微结构及其相关终 末分化指标的表达变化．实验结果显示，经 5mmol／LHMBA处理后，MG-63细胞体积增大。趋于扁平铺展状态，细胞大 小较为一致，排列较为规则，细胞核形态规则，核质比例减小，核仁减少，核 内异染色质减少 ，常染色质增多，细胞核 内的 线粒体和高尔基体较为发达，内质网数量增多，细胞表面的微绒毛减少，在成熟细胞中可见钙化糖原颗粒，细胞表面出现 钙化小泡沉积，并且形成典型的骨结节．常规细胞化学和免疫细胞化学检测显示，HMBA处理后的细胞中I型胶原纤 维、骨钙素、骨粘素的表达显著增加，实验结果表明HMBA能够有效诱导人成骨肉瘤细胞的分化，并促进其终末分化指 标 的表达． 关键词：环六亚甲基双乙酰胺；细胞分化；人成骨肉瘤；细胞形态与超微结构 中图分类号 ：Q247；Q28 文献标识码：A 文章编号 ：0438—0479(2007)06—0836—06 肿瘤细胞的终末诱导分化研究不仅是癌细胞终末 分化研究的重要方向，而且还是调控肿瘤细胞基因表 1 材料与方法 达，逆转肿瘤细胞恶性表型，探索癌细胞增殖分化调控 1．1 细胞培养和诱导分化处理 和肿瘤生物治疗新途径研究的重要方向．选取恰当的 人成骨肉瘤MG-63细胞(购 自武汉大学动物资源 肿瘤细胞终末分化诱导模型是进行肿瘤细胞终末诱导 保藏中心)培养于RPMI一1640培养液中(内含 15 热 分化研究的前提和基础 ，它能够为终末诱导分化研究 灭活小牛血清、100U／mL青霉素、链霉素、50#g／mL 提供合适的判断标准和研究体系．成骨肉瘤细胞起源 卡那霉素，pH7．2)，于 37℃培养．HMBA(购 自Sigma 于成骨细胞的前体或分化为成骨细胞的骨髓间充质干 公司)先用少量 D-HankS液溶解 ，然后用培养液配成 细胞，它是具有成骨细胞表型特征的一类特殊肿瘤细 500mmol／L干液，过滤除菌后于4℃保存，临用前用 胞群体[1]．成骨肉瘤细胞能够代表分化早期的成骨细 培养液稀释成 5mmol／L作用液．取对数生长期的 胞，其分化的过程类似于成骨细胞，分为细胞增殖、细 MG-63细胞进行消化传代，接种24h后，对照组换新 胞外基质成熟和基质矿化 3个阶段，在体外分化的过 鲜培养液，诱导处理组更换HMBA作用液． 程中也表达I型胶原纤维以及骨钙蛋白、骨粘素、骨桥 蛋白等非胶原蛋白．目前在成骨肉瘤细胞分化研究方 1．2 光学显微镜样品制备 面尚缺乏对细胞形态与超微结构和终末分化指标的系 将对照组细胞和处理组细胞分别以5×lO‘个／ 统性研究工作．为此，本研究采用化学诱导物 HMBA mL的细胞浓