大鼠Walker-256移植性肺癌模型的建立.pdfVIP

第十一届中南地区实验动物科技交流会论文集 changes in other organs.Conclutions Injection of high doses of walker-256 cells can successfully replicate the transplanted lung cancer model, which provides a experimental base for the promotion of lung cancer model. 【Key words 】Lung cancer model ; transplanted lung cancer;walker-256 肺癌是目前死亡率最高的癌症之一。建立理想的动物肿瘤模型是研究恶性肿瘤发生、发 展、转移及疗效评价的重要手段。其中，可移植肿瘤模型因操作简便、易于观察，得到了学 者们的广泛认可。Walker-256 是目前广泛认可的大鼠可移植性肿瘤细胞株，植入体内能较 好地模拟人类恶性肿瘤的膨胀性和浸润生长方式[1] 。目前，学者们主要应用Walker-256 细胞 植入大鼠支气管[2]，构建原位性肺癌模型。但此造模方法对实验技术要求较高，而且动物死 亡率也高，在实际应用中成模率低；而采用尾静脉注射建立肺癌移植性模型鲜见报道。本研 究采用静脉注射建立大鼠Walker-256 移植性肺癌模型，观察动物的成瘤及生存情况，为进一 步的肿瘤实验研究奠定基础。 1 材料和方法 1.1 材料 大鼠 Walker-256 瘤株，由中山大学实验动物中心细胞库提供；K.M 小鼠，4 只，体重 18~22g，雄性，SPF 级， 实验动物质量合格证明号：0084621 。SD 大鼠 40 只，体重 60-70g， 雄性，SPF 级，实验动物质量合格证明号：0084696, 均购于中山大学实验动物中心。动物 饲养在标准的屏障环境动物实验室。实验动物设施使用证明号：0055776 1.2 实验方法 1.2.1 细胞的复苏和腹水的制配 Walker-256 癌细胞常规复苏，置于新生小牛血清的 RPMI-1640 培养液中，低速离心， 7 弃上清，再用培养液配成细胞悬液（1×10 /ml ），将细胞悬液接种到K.M小鼠腹腔中，0.2ml/ 只，5～7 d后出现腹水。 1.2.2 移植性肺癌模型的建立 将K.M小鼠的Walker-256 细胞腹水，无菌操作，用 5ml一次性注射器（6 号针头）抽出 腹水，用生理盐水稀释，用细胞计数仪进行计数，再用生理盐水稀释成高、中、低三个浓度 6 -1 5 -1 5 -1 （分别为1.2×10 ·ml ，4×10 ·ml ，2×10 ·ml ）备用。选取40 只SD大鼠随机分为高、中、 低三个模型组和正常对照组，共 4 组，每组 10 只，采用尾静脉注射接种法，模型组注射细 胞不同浓度的腹水细胞悬液，0.2ml/只，正常对照组尾静脉注射等量的生理盐水，所有动物 888 第十一届中南地区实验动物科技交流会论文集 饲养在屏障环境动物实验室中。 1.3 观察指标 观察注射癌细胞悬液后动物的毛色、体重、饮食、活动情况；各模型组的生存时间； 移植性肺癌模型的成瘤率；当模型组有动物死亡出现时结束实验观察，采用颈椎脱臼法处死 全部动物，常规解剖，肉眼观察肺部的成瘤情况及其它器官有无肿瘤转移。称取各组动物的 肺部、肝脏、脾脏的重量。HE 病理学检查：取所有动物的肺和可疑脏器，用 10%福尔马林 固定，常规石蜡包埋，进行HE 染色，观察病理形态学变化。 1.4 统计学处理 用 SPSS 17.0 软件包处理，数据以x ±s 表示，组间差异采用独立样本 t 检验，P0.05 被 认为存在显著的统计学差异。 2 结果 2.1 动物的活动情况及体重变化 模型组动物注射肿瘤腹水细胞悬液后 7d 动物饮食、体征正常，14d 后动物出现食量明 显减少，活动少，倦怠状，对外界刺激反应迟钝，皮毛松、无光泽，体质消瘦等癌症恶病质 体征。注射后 7d、12d、14d 和 21d ，高、中、低三个模型组体重均明显低于正常