CAPN1基因在草原红牛初生牛与成年牛8种组织中的表达差异.pdfVIP

第一部分遗传育种及产业发展趋势 的候选基因，研究CAPNl基因的遗传表达对牛肉质品质的改善具有重要的意义。蔡欣等¨1应用nested down 和touch 哺乳类对应序列具有较的同源性。朱燕等【21采用实时荧光定量PCR方法研究了中国黄牛背最长肌中 CAPNlmRNA表达与嫩度的关系。结果表明CAPNlmRNA的表达可能是影响牛肉嫩度的主要因素 且CAPNl在不同黄牛个体中蛋白水平的表达也在差异。 本实验采用实时荧光定量RT—PCR技术检测CAPNl基因在草原红牛四个阶段8种组织中的表达 情况。以期找到CAPNl基因调控机理的变化规律，从分子水平为研究该基因的表达调控打下基础， 也为今后肉牛的遗传改良提供新的选择依据。 1材料与方法 1．1试验动物与样品采集 选用吉林省农业科学院畜牧分院种牛场饲养的草原红牛18头(初生牛n=9，成年牛n=9)，按 国家标准统一饲养，育肥结束后进行屠宰。屠宰后分别取心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、瘤胃、十 二指肠、背最长肌组织迅速液氮保存，--80℃储存备用。 1．2主要试剂及仪器 TRlzol One RT—PCRKit)，SYBR—GreenI Reagent，购自Invitrogen公司；RT—PCR试剂盒(BioRTStep Extraction Mini 凝胶回收试剂盒(Gel Kit)、小剂量快速质粒DNA提取试剂盒(E．Z．N．A．PlasmidKit)， 2102 PC型 购自OMEGA公司。ABl7500荧光定量PCR仪(AppliedBiosystems公司，USA)，Uv 紫外分光光度计(尤尼克上海仪器有限公司)。 1．3荧光定量PCR 1．3．1 eDNA的获得 p ul反转录体系：5 浓度，使反转录体系中总RNA量一致，均为2．0 g，确保定量精确性。建立10．0 Revere ×RNARTBuffer，2．0lal；dNTP Il Hl；AMV Mixture(10mM)，1．0l；Oligo—dT，0．5 la 1．t RNA，2．01．L freeI-120， 1：Rnase 1；Total 1；Rnase Transcriptase(5U／u1)，0．5inhibitor(40U／u1)，0．5 3．5p 1．3．2引物设计 5设计引物，由上海生工生物技术有限 参GAPDH(Genbank号：AB038240)，应用Primer premier 公司合成。本研究引物退火温度均设计在60*C，引物设计如下： CAPNl：GA．PDH：F：A11℃TGGCAAAGTGGACATCG 1．3．3 实时荧光定量PCR Green 采用SYBR p la la ul：eDNA u mix，12．5l：Forward／ReversePrimer(10 l；Rox，0．5 1／pm01)，0．5 Template，1．0l；T