微小RNA21表达在卵巢癌细胞生长和凋亡过程中的作用.pdfVIP

．684· ．基础研究． 微小RNA一21表达在卵巢癌细胞生长 和凋亡过程中的作用 娄艳辉崔竹梅王福玲杨兴升 【摘要】 目的探讨微小RNA-21(milt-21)在卵巢癌细胞生长、凋亡中的作用及调节机制。方 法构建表达miR-21的重组干扰载体pSmEN-milt-21质粒，采用酶切鉴定和测序法证实。实验分为 3组，即转染组：卵巢癌细胞株OVCAR3细胞转染重组干扰载体pSmEN．miR-21质粒；阴性对照组： OVCAR3细胞转染阴性对照pSIREN—miR-21-Neg质粒；空白对照组：OVCAR3细胞不转染质粒。采用 茎环实时荧光定量逆转录(RT)-PCIt技术检测3组细胞中miR-21的表达，蛋白印迹法检测3组细胞 中程序性细胞死亡因子4(PDCD4)蛋白的表达，四甲基偶氮唑蓝(1VITr)比色法及流式细胞仪检测 3组细胞的增殖及凋亡情况。结果成功构建了表达miR-21的重组干扰载体pSIREN—miR-21质粒， 并经酶切鉴定和测序法证实。转染组、阴性对照组和空白对照组OVCAR3细胞中miR-21的表达水 平分别为0．26±O．08、1．26±O．21和1．00，转染组明显低于阴性对照组和空白对照组，差异有统计学 意义(PO．01)。转染组、阴性对照组和空白对照组OVCAR3细胞中PDCD4蛋白的灰度值分别为 1443 4-33、858±19和846±16。转染组明显高于阴性对照组和空白对照组，差异有统计学意义(P 4- 0．01)。转染组、阴性对照组和空白对照组OVCAtl3细胞增殖的A值分别为0．661±0．015、o．848 0．150、0．935-t-O．133，转染组明显低于阴性对照组和空白对照组，差异有统计学意义(P0．01)。转 染48 h后，转染组细胞的早期凋亡率明显高于阴性对照组和空白对照组[分别为(25．821± 0．763)％、(0．010±o．003)％、(0．238±0．023)％；P0．01]；转染72h后，转染组细胞的早期凋亡率 和晚期凋亡率均明显高于阴性对照组和空白对照组[早期凋亡率分别为(30．4804-0．821)％、 0．067)％、(1．049±O．028)％，P0．05]。结论miR-21参与调节卵巢癌细胞的生长和凋亡过程，可 能通过调控PDCD4蛋白的表达而发挥作用。 卵巢肿瘤； RNA结合蛋白质类；凋亡调节蛋白质类；细胞系，肿瘤； 【关键词】 微RNAs； 细胞凋亡 RoIeof inthe and ofovarian CaldllOIlllacells加U microRNA-2l el口ithdlal prol|terationaooptosis Yah—hu／‘．CU|Zhu—mei。WANG Fu-ling，YANGXing-sheng．‘DepartmentofConecology．affaiateaHospital Medical of 266001，China College，qingdaoUniversity，qingdao author：Z力UYah．Imi．Email：Zy^7497@』以COltl, Corresponding of theroleandmechanism the 【Abstract】0bjecti他Toinvestigate microRNA-21(miR-21)in and ofovarian carcinomacells．MethodsA RNA proliferationapoptosis epithelial short．hairpinspecifically mill-2l