新型导向性纤维蛋白原受体拮抗剂的设计及其基因表达.pdfVIP

新型导向性纤维蛋白原受体拮抗剂的设计及基因表达’ 杨洁杨坤王小梅冷瑶王福祥姚佳杨建波 南京大学生命医药生物技术国家重点实验室南京210093 【摘要】纤维蛋白原受体拮抗荆是当前抗血小板聚集药物研究的重要领域。利用同源 模建方法构建纤维蛋白原受体的结构，并在序列比对和分子模建的基础上，推测并确定 纤维蛋白原及其受体相互作用的结构域。构建同时具有活化血小板导向性和纤维蛋白 原受体拮抗作用的新型融合蛋白膜联蛋白v一巨蛭蛋白(矾r·商nV—d咖sjn)。在深入 进行融合蛋白分子设计、优化和结构模建的基础上，构建并在大肠杆菌中高效表迭了膜 联蛋白v一巨蛭蛋白一C端融合蛋白和膜联蛋白V。通过对一系列不同长度的巨蛭蛋 白一c端的设计。并对其进行膜联蛋白v一巨蛭蛋白一C端融合蛋白的分子构建以及 融合蛋白与纤维蛋白原受体复合物的相互作用关系研究，能量分析结果显示，膜联蛋白 v一巨蛭蛋白12。39∞可能具有较好的纤维蛋白原受体拮抗活性。这还有待于对膜联 蛋白v一巨蛭蛋白12，39口融合蛋白分子进行一系列生化性质分析和药理活性检测。 希望重组膜联蛋白V一巨蛭蛋白12—39∞融合蛋白既保留了膜联蛋白V和血小板结合 的性质，又具有明显的纤维蛋白原受体拮抗活性，而且具有较高的抗血小板聚集活性。 【关键词】纤维蛋白原受体桔抗荆，分子模建，融合蛋白，抗血小板聚集活性 一、前言 目前，心脑血管疾病的发病率和死亡率已居世界发达国家的首位，而血小板功能特别是聚集 性异常与多种心脑血管疾病的发生有关，因此研究和开发高效低毒的抗血小板聚集药物十分重 kna的血浆糖蛋白，结合于激活的血小板上，是血小板聚集的最 要。纤维蛋白原是分子量为340 后一步。这种结合完全由糖蛋白GPⅡb，Ⅲa中介，而cPⅡh，Ⅲa整合素的表达是所有激动剂引起血 小板聚集的最终共同途径。同时，咖b／Ⅲa是血小板聚集和粘附因子，在血小板中仅以钙离子依 赖性异二聚体的形式存在。在内皮损伤处，它与一些粘附蛋白(如vWF、纤维蛋白原、纤连蛋白、 玻连蛋白等)结合，导致血小板聚集和血栓形成。由于CPⅡb／Ⅲa是血小板表面唯一最丰富的糖 蛋白，因此它可能成为药物发挥阻滞作用的极佳靶标。可见，血纤维蛋白原受体拮抗剂的研究将 成为抗血小板聚集药物研究的主要方向。 伽b，Ⅲa之所以能够与这些不同的粘附蛋白结合是由于它具有识别RGD肽序的结合位点。 *本课题为国家自然科学基金资助项目(项目批准号：3017埘4) 一151— x射线晶体结构显示，纤维蛋白原是一个对称性的多聚分子，各含两条a、B和7链；它与GPⅡb，Ⅲ 些结合位点对进一步的药物设计具有一定的指导意义。而且，不论血小板激活程度如何，能阻滞 纤维蛋白原与伽b，Ⅲa结合的药物就能消除血管损伤或粥样硬化斑破裂所致的血栓形成。 自1987年首次从蛇毒中分离出纤维蛋白原受体拮抗剂禾草竹叶青蛋白(埘舯r血)源自禾草 竹叶青(斑Ⅷm“s gm以n—)以来，目前国外有关这方面的报道主要涉及生物大分子、肽类和非 肽类分子的研究。对于生物大分子类纤维蛋白原受体拮抗剂的研究正处于基因工程阶段；而对 于小分子类纤维蛋白原受体拮抗剂已不再局限于肽类分子的研究，而是广泛地开展肽的类似物 和非肽类分子的研究，而且这些化合物能够克服大分子多肽的潜在抗原性，具有较高的口服生物 利用度，且半衰期也大大延长，但缺乏一定的导向性。尽管GPⅡb，Ⅲa的x射线晶体结构未知，我 们采用间接药物设计方法进行新型导向性纤维蛋白原受体拮抗剂的合理设计。 人膜联蛋白v(mnainv)最初是从人胎盘中纯化，因其抗凝活性，最初被称为人胎盘抗凝蛋 白。在动物动脉栓塞模型中，放射性标记的膜联蛋白v能选择性地聚集于动物模型的血栓处， 浓集于动物模型血栓处的膜联蛋白v比对照蛋白质高13倍。膜联蛋白v抗凝作用的机制可能 是将凝血因子从膜上替换下来，使凝血因子失去一个聚集进而促发凝集的表面环境，使凝血反应 能被抑制至原有速度的5％。近来科学家广泛集中在研究膜联蛋白v作为造影剂用于心脏移植 排斥、心脏衰竭、心肌炎、肾脏疾病、急性心肌梗塞、心肌缺血和再灌注损伤等的动物及人体内的 适时监测。由于膜联蛋白v属于钙离子依赖的磷脂结合蛋白，并分别通过与凝血因