香菇多糖增强5-FU抑制结肠癌细胞增殖机制研究.pdfVIP

一 992 ChinJLabDiagn，June，2012，Vol16，No ． 6 文章编号 ：1007—4287(2o12)06—0992—03 ＼ · 、 _ 香菇多糖增强 5一FU抑制结肠癌细胞增殖机制研究 袁 昌劲 ¨，孔庆志 ，卢宏达 ，孔双喜。 (1．武汉’市中心医院 肿瘤科，湖北 武汉 430014；2．华中科技大学附属同济医院肿瘤科) 香菇多糖主要为甘露糖甘肽，其余为多种糖分 加入工作液处理 24h后 ，PBS洗涤 3次更换新鲜培 和各种氨基酸等，对光和热稳定 ，不溶于 甲醇、乙醇 养基培养。每 天 MTT法检测一孔，每孔加入 5 和丙酮等有机溶剂[1]，联合抗肿瘤药物对 胃癌 、结 mg／mlMTT溶液 2O l，37℃孵育4h后弃去，加人 肠癌Ⅲ3]、肺癌 等肿瘤具有 良好的疗效，显著延长肿 DMSO50 l，振荡 15min充分溶解结晶，酶标检测 瘤患者存活时间。目前对香菇多糖的抗肿瘤机制仍 仪上测定波长为 490am 下的吸光值 (A 值)，每孔 然不清楚，一般认为和免疫调节有关 。香菇多糖是 细胞吸光度=测得值一空 白对照孔值。以吸光值为 典型的T细胞激活剂 ，体内外均能促进细胞毒 T淋 纵坐标，以时间(天)为横坐标 ，绘制 Len组、FU组 、 巴细胞 (CTL)的产生 ，提高 CTL细胞杀伤力，增强 L+F组和正常未处理组SW480结肠癌细胞增殖曲 正常或免疫功能低下小鼠的迟发型超敏反应，提高 线。 抗体依赖性细胞毒作用 ，同时能结合到人单核细胞 1．4 流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡 上激活内源性信号传导通路_5 ；本文应用香菇多 药物处理 24h后收集细胞并离心 ，细胞沉淀用 糖及 5-FU处理 SW480结肠癌细胞 ，探讨其对细胞 PBS洗涤，加入标记有异硫氰酸荧光素 的连接素 增殖和凋亡的影响 ，并研究其可能作用机制。 AnnexinV-FITC和碘化丙锭，避光孵育 15min后 1 材料与方法 检测细胞凋亡，另制成 200j上l细胞悬液，加入 70 1．1 材料 的冰乙醇 5ml一20℃固定 24h以上 ，加入 RNase SW480结肠癌细胞购 于美 国 ATCC，RPMI一 A200 ，37。C温育 30min，加人碘化丙啶至终浓度 1640、双抗和 FBS购于 Gibco公司 ，MTT试剂购于 50mg／L，检测细胞周期 。增殖指数 (PI)一(S+G ／ Sigma公 司，RNA 提 取 和 RT—PCR 试 剂 盒 购 于 M)／(G。／G1+S+G2／M)。 Takara公司，引物 由上海生工公司合成 ，香菇多糖 1．5 RT-PCR检测 多药耐药基 因MDR1、MRP1和