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动物取材与固定 一、动物取材 （一）动物处死要求： 动作迅速，及时解剖、取材与固定 （二）动物处死的方法： 可采用麻醉法、空气栓塞法、颈椎脱臼或断头、动脉放血等。 1、狗用麻醉法或击头法 2、猫用窒息法 3、兔用栓塞法 4、小白鼠用断颈法 （三）动物取材选择 根据实验要求首先选择动物种类，其次选择组织部位及取材的大小，取材时应熟悉组织器官的结构特点。 1、动物选择 2、部位选择 3、切面方向选择 （四）取材要求 1、新鲜 2、小而薄 1.5cm×1.5cm ×0.5cm 3、保持原有的形态 4、注意环境温度的影响 5、刀、剪要锋利 二、动物组织固定 （一）固定的目的和意义： ①防止离体组织、细胞自溶与腐败，保持组织、细胞与生活时相似的形态和结构； ②使细胞内的蛋白质、脂肪、糖、酶等各种成分转变成不溶性物质，使其保持原有的结构； ③使组织中的各种物质沉淀、凝固后产生不同的折射率，形成光学上的差异，以便染色后易于观察和鉴别； ④固定剂有硬化作用，可增加组织硬度，便于制片； ⑤保存抗原及DNA、RNA，特别是准备用于做免疫组化染色和核酸原位杂交的标本，及时而恰当的固定尤其重要。 （二）动物组织取材与固定 1、成年家兔 栓塞法处死 取下列组织 ①心肌 （心脏乳头肌）入ADF液中固定24h ②骨骼肌（舌肌）入中性甲醛的固定液液中固定24h ③神经节（颈胸椎处）入高尔基体固定液中固定18h ④脊髓（颈胸椎处）入2%的硝酸银水溶液中固定 每班两只 两组同学完成。 2、成年猫 窒息法处死 取下列组织 ①神经节（颈胸椎处）入高尔基体固定液中固定 ②脊髓（颈胸椎处）入2%的硝酸银水溶液中固定 ③卵巢 入中性甲醛固定液中固定 ④膈肌入中性甲醛固定液中固定 每班壹只 两组同学完成 3、一月龄家兔 栓塞法处死 ① 取肋间肌，剪成0.2cm×0.2cm见方的肌肉颗粒（共剪100 颗）。 ②取剪好的肌肉组织入蚁酸溶液中固定15min左右，呈半透 明状即可。 ③不经水洗，直接放入1%的氯化金水溶液中浸染15-60min左 右，肉眼观察见肌肉组织呈金黄色即可，如已成棕色表明浸 染过度，所以应随时观察。 ④将已经还原好的肌肉组织用蒸馏水涤数次，放在滤纸上将 组织上的水分沾干，再转入甘油酒精（甘油一份，50%酒精 一份）中保存备用。 4、小白鼠 断颈法处死 ① 取小肠，用生理盐水将肠道内清洗干净，剪成2cm长的小段，入Regaud固定液中固定 线粒体切片标本的制作 1、取材： 小白鼠小肠或肝 2、固定：入Regaud固定液固定2天（每天需更换一次固定液） 3、媒染：入3%重铬酸钾水溶液中媒染7天（每两天更换一次新液） 4、冲洗：先用自来水冲洗24小时，然后用蒸馏水浸洗数次。 5、脱水透明：在酒精中从低浓度到高浓度依次脱水，100%以下的浓度每次1小时，在100%酒精中2次，每次30分钟，转入二甲苯2次透明，每次30分钟。 6、浸蜡包埋：等量二甲苯与软蜡1次，软蜡1次，硬蜡1次，每次30分钟，用纸盒或金属包埋盒包埋。（包埋时注意切面方向） 7、切片贴片烤片：载玻片上涂少许蛋白甘油，切片厚度2-4微米，在贴片容器中贴片，入37 。C恒温箱中烘烤24小时。 8、脱蜡入水：二甲苯2次，每次10min, 100%酒精中2次,每次5min, 100%以下的浓度每次2min，下行至蒸馏水。 9、媒染：入5%铁明矾水溶液中媒染24小时（ 37 。C恒温箱中）。 10、染色：蒸馏水速洗后入苏木精染液中染色24小时。 11、分色：蒸馏水速洗后入2.5%铁明矾水溶液中分色，数秒后，显微镜下镜检，见细胞核和线粒体呈黑色，细胞质呈无色或灰色即可。此步骤非常关键，一定要不间断镜检。 12、返蓝：自来水浸泡数小时 13、脱水透明：与第8步骤（脱蜡入水）相反方向操作即可。 14、镜检封固：镜下检查，染色合格的切片滴1滴中性树胶，盖上盖玻片。放入凉片盒中。 高尔基体切片标本的制作 1、取材： 猫或兔的神经节 2、固定：入高尔基体固定液固定8-18小时 3、冲洗：用蒸馏水速洗2次。 4、镀银：入2%硝酸银水溶液中镀银48小时（室温下、避光） 5、冲洗：用蒸馏水速洗2次 6、还原：入硝酸银还原液中24小时 7、冲洗：用蒸馏水速洗2次 8、脱水透明：在酒精中从低浓度到高浓度依次脱水，100%以下的浓度每次40分钟，在100%酒精中2次，每次20分钟，转入二甲苯2次透明，每次20分钟。 9、浸蜡包埋：等量二甲苯与软蜡1次，软蜡1次，硬蜡1次，每次20分钟，用纸盒或金属包埋盒包埋。 10、切片贴片烤片：载玻片上涂少许蛋白甘油，切片