反义TβRI及与反义TIMP-1联合作用对实验性肝纤维化影响.pdfVIP

鼠反义TpRI及与反义TIMP-1联合作用对实验性肝纤维化的膨响 藏反义T龊l及与葳义了l鬃p{联合雩譬懑对实验牲翳缛维就的影痢 摘 要 骛暴与鹫懿：嚣绎维纯是捺滚罢静馒性翳建酶共霹痞理基础释蒋征，群脏缵照卦基囊国翔》蕊台残与 降解失衡、喾致ECM在翳内酾过度沉积是瓣缚维纯袭袋静主要祝裁。爱旃裳于翳纤维纯的研究已达 成共识：肝纤维化是可逆性病变，而肝硬化则不可逆转。因此阻止和越缀肝纤维化的发生、发展是 溃疗肝硬化的关键环节。 研究发麓在致；j手野缍稼懿缨照霹子串最重要毒蠹小援褥诧生长隧予(PDGF)雾转诧生长嚣子 factor B(transforminggrowth 8，TGF-#)，其中TGF-#是最强有力的激纤维忧细胞因子。近几 年，肝纤维化中TGF—B的～般信号传导邋髂已基本阐明：酋先活化了的懈F_B与II烈TGF—B受 S 体(TRID缝合著使之磷酸他藤具有激酶溪性；与氍F一§结台懿T§RII再结合I型粥卜§受俸 疆§RI)黟藏I、II墅受髂囊会镑，并整T》Rj薅馥毒乏爨肖滋簿活毪：最露，澈活爨T§RI激矮酶 pRI和TB 即TGF_B发挥作用必须借助其在细胞膜上的跨膜受体，T RII。故从理论上，可推钡4选择 涟撺裁T§RI懿表速，斑可影蟪豫卜8糖等终导，甄两搠裁TGF-》静健终难凭搀焉。 制因子(tissueinhibitorof 与降解之间的平衡。当有损螺因子作用于群脏，使HSC活化，手丁破了NiPs与TIMPs的平键，就会导 致黢嚣绎绻洚解懿壤乡；致使大量簿驳礞在器趣织孛溪积。断盎主要存在涎TIN’s鸯Tl鼯一1移 辩},BIP-1／^§掣一13豁搀毒I律矧，增燕E喇约降勰，减少ECM趣沉积，延缓群纤维纯的发生、发震。 我誊j瘟嚣重组DNA技零蒜建霾义T}RI囊挟麴麓表这震鞍霹厦冀TI§IP一1粪辕缨麓表达震黻，导灭夫 鼠肝纤维化横疆中。一方面，通过选择性抑制TBRI的表选，调节TGF—B储号传导，从而抑制TGF—B 鲤活性，减少ECM翦沉积，最终霹薅在瑟个耀节土干强瑟纤维继魏发生、缎震。 材料襄方法# g／L 1．反义斌粒的构建和鉴线：取一80℃冰冻保存的大鼠肝组织，应用TRIzol法提取总RNA，15 琼脂糖凝胶电泳检测RNA竞熬性，并用紫外分光核酸蛋白分摄仪测定RNA浓度和纯度。馈殿一步法 逆转录聚台簿遽反盎攘}P￡辩试裁盒获褥襄麴基窭罩}RIeDNA片段，莱焉鬃式PCR扩增l§RI蓦鑫 BRI基阁片段定向 片断。用Cacl2法诱导感蹙淼细胞。将纯俄阐收的pcDNA3．1(+)线性化载体和T 及反向连接，构建以pcDNA3．1(十)为载体的殷义TBRI基因真核表达质粒。转化J^i109犬肠杆菌。 酶馁证实昭龋性竞隆行测彦分播。 2。太鬣§f鲟维诧旗型测番及蒺鞋导丸：寄散进天实验的太惑蔺黑。安骏夫鬣建辊势为$组：反 义TBRI治疗纽(A组)、反义TB 空质粒对照缀(D组)、模型对照组m组)、正常对照组m组)。每组15只。采用四氯化硪复合法制 鼓聂义T断l瑟每茬义TIIII》-1联合作幂鞋实验往群辫壤健的影响 备大鼠肝纤维化模型，备治疗组按组别将艇义基因导入大鼠肝纤雅化模型，每次100 Pg，每9天1 次至第8周，共注射5次，最后一次滤射与前一次注射隔4天，重组质粒给予前按比例与 Lipofectmine2加0混匀静置30rain，经腹腔导入体内。实验进入笫8周时，各组随机宰恭一只大 藏，确定模型对照级趣鳃)病理学诊断进入瓣域倦阶段矗，在最蜃一次40％CClt油溶液皮下注射蓐 2天宰杀实验囊耱。 3．结果观察；庶用苏木素一伊红染色、蔷睬酸一酸性品红染色(VG)税察肝组织病理形态学变化， 进行肝纤维化分级；应用免疫组化的方法观察肝组织中TIMP-1，E@13，及I型胶原的袭遮，并应