2011RORαmiRNA真核表达载体构建及对人胃癌细胞增殖的影响.pdfVIP

中国现代 医药杂志 2011年2月第 13卷第 2期 MMJC，Feb2011，Vol13，No．2 论 著 RORo~miRNA真核表达载体构建及对人 胃癌 细胞增殖的影响 凌晖 陈真伟 曾铁兵 文玲 苏琦 彭娟 张杨 【摘要】 目的 构建RORc~(Retinoidacidreceptorrelatedorphanreceptor13．，维 甲酸相关孤核受体 Ot)miRNA真核表达 载体 ，分析其对人 胃癌 MGC803细胞 RORct蛋 白表达及细胞增殖的影响。方法 构建针对设计 RORamiRNA表达 的3对 miRNA干扰序列 ，克隆人 pcDNATM6．2一GW ／EmGFPmiRNA真核表达载体 ，在测序鉴定无误后将含 RORamiRNA转染人 胃癌 MGC803细胞 ，用 Westernblo检测 MGCS03细胞转染前后 RORct蛋 白的表达水平变化 。MrI1’法检测对转染 MGC803 细胞增殖的影响。结果 Western blot结果证实 ，MGC803细胞转染 RORc~miRNA后 24hRORc~蛋 白表达水平 明显低于转 染阴性组(PO．05)。Mrrr结果显示 ，转染 RORotmiRNA后细胞增殖率 (光吸收值)高于转染阴性组(PO．o5)。结论 miRNA 靶 向抑制 RORc~表达后 ，可促进人 胃癌 MGC803细胞增殖 ，提示 RORc~是一个潜在 的胃癌基 因及药物治疗的靶点。 【关键词 】 胃癌 维甲酸相关孤核受体 Ot 微小 RNA 增殖 Constructionofhuman ROR alphamiRNA eukaryoticexpressionvectorand itseffects onproliferationin gastriccan· cercells LingHui，ChenZhenwei，ZengTiebing,eta1．UniversityofSouthChina,Hengyang421001 A【bstract】 objective ToconstructaRORalphamiRNAexpressionvector，andevaluateitseffectsonRORalphapro— teinexpressionsandproliferationinMGC803gastriccancercellsinvitro．Methods ThreepairsofRNAinterferencesequences ofROR alphatargettingRORc~miRNA wereclonedintotheeukaryoticexpressionvectorpcDNATM6．2一GW ／EmGFP．Afterse— quencing，thevectorwasthentransfectedintoMGC803cells．ThechangeofROR alphaproteinexpression intransfected cells weredemonstratedbvWesteIT／blot．Theimpacton proliferationin transfectedMGCS03cellswasinvestigatedbyMIT method． Results WesternblotshowedthatthelevelofRORalphaproteiningastriccancerMGC803cellswasdistinctlydecreasedafter transfectionwithRORalphamiRNA for24h．TheOD570valueofmiR-ROR alpha24htransfectiongroupwashigherthannegative controlgroupshowedbyMqTmethodfP0．05)．Conclusion InMGC803gastriccancercells，RORalphaisinvolvedinthereg— ulationofproliferation，suggestingROR alphaisapotentialtargetofrtreatinggastriccancerwithgenesanddrugs． 【Keywords】 Gastriccancinoma RORalpha MiRNA Proliferation 作为消化道最常见的恶性肿