br基因的定点突变与表达.pdfVIP

浙 江 大 晕 晕 报 (T学版) 第 37卷第 3期 Journal6fZhejiangUniversi@(EngineeringScience) VMO1．37NO．3 2003年 5月 ay 2003 br基 因的定点突变与表达 潘笑娱 ，吴 敏 ，乔守怡 ，阮 红 (1．浙江大学 生命科学学院 浙江 杭州 310027；2．复旦大学 遗传研究所 上海 200433) 摘 要 ：细菌视紫红质 (bacteriorhodopsinBR)是极端嗜盐菌 (Halobacteriumhalobium)紫膜上 的一种光能转换色素 蛋 白，是一种极有前途 的生物光电材料．野生型 BR蛋 白达不到实用光 电材料的要求 ，因此 ，通过对细菌视紫红质 基 因 (br基因)的定点改造 ，构建和表达 BR突变体成为生物光 电材料研究中的一个热点．以野生型 br基 因为模 板 ，通过连续 PCR 的方法向br基 因引入一个点突变 ，并将之克隆至 pUC19载体 中．将经测序鉴定的br突变基 因 重组到穿梭质粒 pNov—R 中并转化 BR缺陷型嗜盐菌 L33，得到紫色阳性克隆．经 PCR分析和 Western杂交检测 表 明，阳性克隆中构建 的br突变基 因获得 了表达． 关键词 ：细菌视紫红质蛋 白(BR)；br基因；定点突变 ；BR突变体 中图分类号 ：Q343．13 文献标识码 ：A 文章编号 ：1008—973X(2003)03—0350—04 Site—directedmutagenesisandexpression of thebacteri0rh0d0psin gene PAN Xiao—yu ，WU Min ，QIAO Shou—yi，RUAN Hong (1．CollegeofL Science，ZhejiangUniversity，Hangzhou310027，China； 2．GeneticsInstitution，FudanUniversity，Shanghai200433，China) Abstract：Bacteriorh0dopsin(BR)isanintegralmembraneproteinfrom Halobacterium halobium thatfunc— tionsasalight—dependentprotonpump．Itisknownasaprom isingbiologicalphotoelectricmateria1．Site— directedmutagenesiswasappliedtomodifythephotoelectriccharacteristicsoftheBR protein from wild typestrain，which playsanimportantrolein studyoftheBR protein．A pointmutationwasintroducedto thegeneofbacteriorhodopsin (brgene)bysuccessivePCR technique，andthemutantgenewasobtained andclonedintopUC19vector．Afteritssequencewasdeterm ined，themutantgenewasclonedintoashut— tlevectorpNov—R andtransformedintoBR—deficienthalobacteria(strainL33)．Purplecloneswerepicked outfrom theplateandwereidentifiedasaBR mutantbyPCR andW esternblotexperiment．PCR analysis showed clearlythatthemutantgenewastransformedintoL33．a