I3合蛋白表达载体与L1融非融合蛋白表达载体的构建与比较.pdfVIP

≯240一?zU Pharma吲m曙 1997年第 l8眷第 5 IL-13融合蛋白表达载体与 非融合蛋白表达载体的构建与比较 王 文， 孙 j 田志刚 王郡甫 刘 杰 张建华 刘钟王寞 山东省医学科学院山东肿宿生物治疗研究中心 (济南 250D62) ． 尺 摘 要 采用RT-IXCR技术直接从擞活的幢康人外周血单十校细胞中扩增得到hIL-13的基 ／ 片殷，通过DINA重组技术分别将其插入到古有PlPL启动子的高敢表选载体pBV==o及古tac启动子， lacl阻遏蛋白基因及凝血酶识别位点的融台蛋白表迭载体pGⅨ一41-2中，成功地构建了hⅡ，13的 原校非融合蛋白表达菌株hⅡ，l3一pBV~0／DHs．及融合蛋白表达菌株ⅫL．13-pGEx一{T一2／TO-．分别经 42C热诱导及异丙基硫代半乳糖昔 (IPTG)化学诱导后，SI3S结果表明IL-13仅以GST融合蛋 白的形式在丑 枷 中获得了表达 ，表达量约 占菌体蛋白总量的10％～30 。Ⅱ广J3的蛋白单体在原校 细胞中表达量很低。 关麓调 ILl31融合蛋白l非融合蛋白j表达载体 —1 一 ～ ＼一 1L-13是1993年才正式命名的一种新的、 I．I．I 质粒和菌株 ．o TG，本室保存 多功能的细胞因子[I】。初步研究表明IL—I3是 菌株{融合蛋白表达载体pGEX-4T一2，Pbama． 一 个重要的新型B淋巴细胞生长刺激因子及 da公司，其N端所具有的原核多肽GST的 遣血生长因子0】，它对于单核巨噬细胞、大颗 分子量为26kD；非融合蛋白表达载体 pBv 粒淋巴细胞、中性粒细胞、内皮细胞等多种细 及宿主菌 ．o DHs，中国预防医学科学院 胞也具有显著的调节作用 在改善机体免疫 病毒学研究所张智清教授惠赠。 功能、控制炎症反应的发生及在机体 lgE介 1．1．2 酶及实验试剂 各种限制性内切酶 导的 I型超敏反应中占有重要的地位[。本 及PCR成套试剂，华美生物工程公司}AMV 实验室在成功地构建了 IL广2、IL-6原核表达 逆转录酶及T噬菌体DNA连接薛 ，Prome~a 载体的基础上 】，于1993年开展了IL-13非 公司}异丙基巯代半乳糖苷(IFIG)，Sigma公 融合蛋白表达载体的构建工作，将hIL-13基 司。 因片段插入到表达载体 pBVm的合适位置， I．2 方法 但却未出现 IL-I3的明显表达 分析各种可能 I．2．I 引物的设计 与合成 参照已知的 的原因，并借鉴国外的经验 ，我们又重新进 hlL-13的基因序列 ，分析其最佳转译起始 行了l【广13融合表达载体的构建工作，并使 区，并考虑了插入非融合蛋白及融合蛋白表 IL-13在原核细胞中最终表达成功。 达载体的酶切位点，设计出特异性的lL_13的 引 物 PI和 Pt 在 P，中，上 游 引 物； I 材料与方法 5