mIL_4昆虫表达载体pIZT_V5_His的构建及其高效表达.pdfVIP

( ) 第 32 卷 　第 2 期 吉 　林 　大 　学 　学 　报 　 医 　学 　版 Vol . 32 No . 2 194 2006 年 3 月 J ournal of J ilin U niver sit y (Medicine Edition) Mar . 2006 ( ) 　　[文章编号] 　167 1587 Ⅹ2006 020 19402 mIL4 昆虫表达载体 pIZT/ V5His 的构建及其高效表达 孙延波 , 李菁华 , 史红艳 (吉林大学基础医学院病原生物学教研室 , 吉林 长春 13002 1) [摘 　要] 　目的: 构建 昆虫表达载体 p IZT/ V5Hi s 的基础上 , 建立能稳定高效表达 m IL4 的昆虫细胞系 。 方法 :PCR 体外扩增 m IL4 , 将 目的基因 m IL4 和昆虫表达载体 p IZT/ V5Hi s 用 Eco R I 和 Xba I 做双酶切 , 通过 T4 DN A 连接酶构建成含 m IL4 目的基因的表达载体 p IZT/ V5Hi sIL4 。采用脂质体法将重组 DN A 转染到生长 良好的昆虫细胞 Sf9 中。转染后的第 3 天 , 用 EL ISA 方法检测转染细胞的培养上清中分泌型蛋白m IL4 的含量 。 结果 : 转染后的昆虫细胞 Sf9 能产生大量的 m IL4 , 含量可达 1 mg ·L - 1 , 明显高于对照组 (0003 mg ·L - 1 ) 。 结论 : 昆虫表达载体 p IZT/ V5Hi s 可用于 m IL4 的高效表达 。 [ 关键词] 　白细胞介素 4 ; 昆虫细胞 Sf9 ; 基因表达 ; 遗传载体 [ 中图分类号] 　Q786 ; 　Q785 　　 [文献标识码] 　A Construction and expression of inset expression vector pIZT/ V5His harboring mIL4 SUN Yanbo , L I J inghua , SH I Hongyan (Dep art ment of Pat hogenobiolo gy , School of Ba sic Medical Sciences , J ilin U niver sit y , Changchun 13002 1 , China) Abstract : Obj ective 　To est abli sh st able in sect cell line exp ressing m IL4 on t he basi s of con st ruction of in set exp ression vector p IZT/ V5Hi s. Metho ds 　Amp lified m IL4 and p IZT/ V5Hi s were t reat ed wit h Eco R I and Xba I , and m IL4 were ligat ed into p IZT/ V5Hi s vector u sing T4 DN A liga se . Sf9 cell s were t ran sfect ed wit h recombinant DNA and EL ISA wa s employed to det ect soluble m IL4 p r