NFkB与CREB交换辅因子介导TNFα对PEPCK基因转录的抑制.pdfVIP

NF-kB 与CREB 交换辅因子介导TNFα对PEPCK 基因转录的抑制1 1,2 2 2 2 2 1 严晋华 ，高占国 ，于刚 ，何庆 ，叶建平 ，翁建平 1. 中山大学附属第一医院，广州 （510630 ） 2. 美国路易斯安娜州立大学Pennington 生物医学研究中心 E-mail ：yanjh79@163.com 摘 要：目的：PEPCK 是肝糖异生的关键酶，其转录受多种激素和炎症因子的调节。NF- kB p65 是受TNF-α激活的重要转录因子，其可能介导了TNF-α的作用。本研究中我们探讨 了NF-kB p65 介导的 PEPCK 基因转录的作用机制。方法：我们选用人 HepG2 肝细胞瘤 株、大鼠 H4IIE 肝细胞株和人胚肾 HEK 293 细胞株，观察瞬时转染 p65 和超抑制 IkBα （ssIkBα，IkBα非降解形式）对 PEPCK 基因启动子活性的影响，共转染 p65 和辅抑制物 RNAi 质粒从而研究p65 抑制 PEPCK 基因转录和 CREB 转录活性所需辅抑制物。结果：表 达超抑制IkBα完全阻断p65 对PEPCK 基因启动子活性的抑制。而在HepG2 ssIkBα稳定表 达细胞系，p65 共转染不能抑制 PEPCK 活性。沉默 HDAC3 或 SMRT 均能阻断 p65 对 PEPCK 的抑制。CREB 的转录活性可被 NF-kB p65 共转染所抑制，而沉默 HDAC3 或 SMRT 均能阻断NF-kB p65 的抑制作用，提示HDAC3-SMRT 复合体通过抑制 CREB 活性 进而介导了 NF-kB p65 对 PEPCK 基因转录的抑制。结论：NF-kB p65 介导了 TNF-α 对 PEPCK 基因的转录的抑制，且抑制作用依赖于 HDAC3-SMRT 的活性。转录因子 NF-kB p65 和 CREB 共享相同的辅抑制物 HDAC3-SMRT ，两者交换辅抑制物介导了NF-kB p65 对PEPCK 基因转录的抑制。 关键词：磷酸烯醇式丙酮酸羧基酶，核因子-kB ，辅抑制物 1. 引言 转录因子NF-kB 的激活在炎症介导的低血糖中发挥关键的作用[1]。以往也有研究显示 NF-kB p65 能抑制糖皮质激素或 cAMP 诱导的 PEPCK 的转录[2]。而TNF-α通过激活核受 体辅抑制物 HDAC3-SMRT 募集至 PEPCK 基因启动子，进而抑制 PEPCK 基因的转录，且 TNF-α对 PEPCK 基因转录的抑制依赖于 IKK/NF-kB 通路的激活[3]。因此，我们假设，在 肝细胞中NF-kB p65 参与调节核受体辅抑制物与PEPCK 基因启动子间的相互作用。 CREB是一个43kDa 的亮氨酸拉链结构的转录因子，最早是在研究cAMP调节基因时发 现并克隆的。CREB 的活性对于胰高糖素调节PEPCK （通过cAMP ）表达最为重要。cAMP 通过激活cAMP依赖的蛋白激酶A （PKA ）使CREB蛋白133丝氨酸位点发生磷酸化，进而启 动CREB与DNA结合和基因转录。此外，CREB 的转录活性还受共激活子的调节，如SRC- 1，CBP (CREB-binding protein)和TORC2 [4-7]等。尽管已知有多种转录辅激活子与CREB相 互作用，但是否存在辅抑制物参与调节CREB 的活性仍然未知。 NF-kB 是以二聚体方式存在于细胞内的转录因子，最早被鉴定也是最常见的形式是由 p50 和 p65 组成的异二聚体。在非激活条件下，NF-kB 和胞浆内的抑制蛋白 IkBs 结合，停 留在胞浆中而不能向核内移动。当上游信号（如TNF-α）刺激后，IkB 激酶（IKK ）使IkB 特定的色氨酸位点发生磷酸化（Ser32 ，Ser36 ），IkB 继而被胞内特异的蛋白酶系统 （Ubiquitin ）识别并降解