一种基于途径分析提高丙酮酸产量的育种策略.pdfVIP

卷 期 ! # 微 生 物 学 报 ’( )! 1’ ) # 年 月 $%% $ !#$ %’()(*(+$ ,-$ *+,-./-0 $%% !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 一种基于途径分析提高丙酮酸产量的育种策略 刘立明 李 寅 陈 坚 （江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室 无锡 $#!%:7 ） 摘 要：为进一步提高光滑球拟酵母发酵生产丙酮酸的水平，在途径分析的基础上提出了一种组成型降低丙酮酸 脱酸酶、但增强乙酰辅酶 合成酶活性的育种策略。通过亚硝基胍诱变，获得 株乙酸需求型突变株 I # JJ5JJ K$%$%#F，在外加乙酸的培养基中表现出高于出发株$#L 的丙酮酸生产能力和良好的遗传稳定性。检测突变株 中丙酮酸代谢相关酶的活性发现：（）丙酮酸脱羧酶活性降低了 ；（）外加乙酸与否的条件下， JJ5JJ K$%$%#F # !% L $ 乙酰辅酶 合成酶的活性分别提高了 和 ；（）添加乙酸和突变对丙酮酸羧化酶、丙酮酸脱氢酶系、乙 I #%: M L 4 M! L : 醇脱氢酶和乙醛脱氢酶的活性没有显著影响。在含有乙酸的培养基中突变株细胞干重比出发株高$#M4 L ，可能是 因为乙酰辅酶 合成酶活性的提高，补充了因丙酮酸脱羧酶活性降低而引起的胞质乙酰辅酶 短缺。在 罐中 I I 4N 含有 乙酸钠的培养基中发酵 ，丙酮酸产量达到 ，对葡萄糖的产率为 。 7HO N 7$@ 76 M4HO N % M7#HO H 关键词：光滑球拟酵母，丙酮酸，丙酮酸脱羧酶，乙酰辅酶 合成酶，育种策略 I 中图分类号： 文献标识码： 文章编号： （ ） PF:: I %%%#87$%F $%% %#8%%448%! 在光滑球拟酵母多重维生素营养缺陷型菌株发 ! 材料和方法 酵生产丙酮酸过程中，硫胺素（ ）作为丙酮酸脱氢 2# 酶系（ ）和丙酮酸脱羧酶（ ）的辅因子，通过 ! ! 材料 QRS QRJ 菌种：出发株为光滑球拟酵母（ 影响乙酰辅酶 （ ）的合成而对积累高水平丙 ! ! ! !./#.0-,- I I?J’I ［ ］ # T ! ） ，为烟酸（ ）、硫胺素（ ）、吡哆 酮酸起着关键作用 。已有研究表明，组成型降 #$%$’$