中性内切型纤维素酶在毕赤酵母中高水平表达的研究.pdfVIP

卷 期 生 物 工 程 学 报 !! %’ (!! ) ( 年 月 !##$ !#$%% ’()*$+, (- .#(/%0$(,(12 *+,-+./ !##$ !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 中性内切型纤维素酶在毕赤酵母中高水平表达的研究 !#$%’(’ )*+,-./+0 +1 2’-/*3 40,+#-.3035’ 6 0 !#$% %’()*’ ! 丁少军 ，宋美静 ，杨红军 ，邢增涛 ，周 蕊 ，曹 杰 ! ， ， ， ， NO)P 6+I*-, 6Q)P R13I*3,B S)P T,BI*-, UO)P V1,BI=+ VTQW 0-3 +,5 EQ *31 南京林业大学生物工程系，南京 !##FG ! 上海农业科学院食用菌研究所，上海 !##$ ， ， ， 3%4+*/5%$/ (- .#(,(1#0+, 6$1#$%%*#$1 7+$8 #$1 9(*%/*2 :$#;%*#/2 7+$8 #$1 !##FG !#$+ ， ， ! +$1+# =0+%52 (- =1*#0),/)*+, 0#%$0% +$1+# !##$ !#$+ 摘 要 中性内切型纤维素酶在纺织及造纸工业具有重要的应用，为了进一步提高从我国草菇中克隆的一种新的中性内切 型纤维素酶（ ）在 中的表达水平，我们进行了提高基因拷贝数及高密度发酵等多种手段实现其高水平表达的 KP ?#0#+ 4 +/(*# 研究。在前期研究的基础上，利用对已整合 %1 的重组子再转化的方法，从含有!### BX Y V123, 的SZN6V 平板上筛选到高抗 ! 转化子，在摇瓶培养条件下，该转化子表达量比原来提高了 倍，在 条件下均有稳定表达，接种量（ V123, F [H 7T J \ H @3$## ] ; [#）表达水平最好，提高甲醇的诱导浓度对表达有显著的促进作用。用F [!Y 发酵罐进行了高密度发酵，甲醇诱导^; [; 后达 到最高值，比摇瓶培养再提高了 倍，因此利用高抗 转化子及高密度发酵的手段，使 的表达水平提高了 倍，蛋 $ [J V123, KP FJ