功能性食品的设计方案食科1102班.docVIP

功能性食品的设计方案： 一.设计题目： 增强人体免疫力——香菇（香菇多糖） 二. 香菇多糖提取原理：香菇多糖，是从优质香菇子实体中提取的有效活性成分，经热水提取的香菇多糖可调节人休内有免疫功能的T细胞活性，可降低甲基胆蒽诱发肿瘤的能力实验方法1． 提取将香菇洗净后除根部后切除根部，菌伞切成小块，放入真空干燥箱（低温）烘干，然后将烘干的香菇小块放在研钵里研磨。用台秤量取香菇粉20g，置于250ml烧杯中，加入100ml蒸馏水，于石棉网上加热至沸，并不断搅拌，煮沸30min后,抽滤。滤渣再用100ml蒸馏水溶液煮沸30min,抽率。合并两次滤液，然后将合并后的滤液加热浓缩至20ml,溶于100ml95℅乙醇，搅拌并冷却至室温，静置1h。将混合液以4000r/min的转速离心10min,得到的沉淀放在真空干燥器中干燥，得到粗香菇多糖。2.除蛋白 将得到的粗糖50ml100热水溶解，加Sevage 溶液 [氯仿：正丁醇=5：1（V/V）] 10ml,剧烈震动 10mim,静置10min， 4000r/min离心10min,取上层清液，加Sevage 溶液反复操作5次3.纯化 将提取的粗糖置于烧杯中，加蒸馏水50ml溶解，向溶液中加入等体积0.15mol/l的CTAB与硼酸-硼砂缓冲液处理，静置10min, 4000r/min离心得沉淀用2mol/l乙酸溶解，静置10min, 4000r/min离心后去上清液加等体积甲醇，静置24h.每周两次，每次一瓶2ml（含1mg），加入250ml生理盐水或5%葡萄糖注射液中滴注，或用5%葡萄注射液20ml稀释后静注。药理作用：香菇多糖是一种具有免疫调节作用的抗辅助药物，能促进T、B淋巴细胞增殖，提高NK细胞活性毒理研究 重复给药毒性：大鼠、犬和猴重复给药试验中均可见网状内皮细胞肿大和增殖，在大鼠（≥0.03mg/kg，1个月；≥0.01mg/kg，3个月）和猴（≥2mg/kg，6个月）中，可见中小动脉动脉炎，在≥2mg/kg组中，部分犬和猴有胃肠道或膀胱出血及皮疹和溃疡。以上病变除大鼠的动脉炎外，仅见于高剂量组，停药后有恢复趋势。猴和犬大剂量注射本品可产生泡沫细胞和血管炎，泡沫反应表现过量的多糖进入组织，特别是。 遗传毒性：本品致突变试验结果阴性。 生殖毒性：雌性大鼠妊娠前给予香菇多糖剂量达1.0mg/kg，未见异常。雄性大鼠给予0.01mg/kg未见授精异常，但在0.1和1.0mg/kg组可见轻至中度授精异常。在大鼠和免器官形成期给药的试验中，最大剂量分别为5.0mg/kg和1.0mg/kg，未见致畸作用，但仔鼠断乳后体重略低。大鼠围产期和哺乳期给予香菇多糖果剂量达5.0mg/kg时未见异常。—5微安的电击设备进行处理，使小鼠的胸腺萎缩，免疫功能下降，然后注射一定量的香菇多糖液，观察并测定小鼠的免疫力增强情况，相同试验重复三次。 1.试验项目（动物试验） （1）体重（绝对体重） （2）脏器｜体重比值 胸腺｜体重比值、脾脏｜体重比值 相对比值越大，免疫能力也越强。 （3）细胞免疫功能测定：小鼠脾淋巴细胞转化试验、迟发型变态反应 ***小鼠脾淋巴细胞转化试验： 采用刀豆蛋白A刺激T淋巴细胞，使母细胞发生增殖反应，活细胞特别是增殖细胞中的线粒体水解酶可将MTT（黄色）分解成蓝紫色结晶。 721分光光度计570nim测定光密度值0D能反映细胞的增殖情况。 受试样品组的光密度差值显著高于对照组的光密度差值，结果为阳性，需方差分析。 ***迟发型变态反应： 二硝基氟苯(DNFB)稀释液与腹壁皮肤蛋白结合成完全蛋白，由此刺激T淋巴细胞增殖成致敏淋巴细胞，4—7天后，再将其涂抹于耳部进行抗原攻击，使局部肿胀，一般在抗原攻击后，24—48小时后达到高峰，其肿胀程度可以反应DTH程度。 用左右耳的重量之差表示DTH程度，受试样品组的重量差值显著高于对照组的重量差值，判断阳性，数据处理采用方差分析。 (4).体液免疫功能测定：抗体生成细胞检测，血清溶血素测定 ***抗体生成细胞检测： 经过绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞悬液与一定量的绵羊红细胞混合，在补体参与下，使分泌抗体的脾细胞周围的绵羊红细胞溶解，形成肉眼可见的空斑。 溶血空斑数反映抗体生成细胞数，用空斑数｜十的六次方 脾细胞数或空斑数｜全脾细胞数表示，受试样品组的空斑数显著高于对照组的空斑数，判断阳性，数据处理采用方差分析。 ***血清溶血素测定 用绵羊红细胞免疫细胞后，产生抗绵羊红细胞的抗体，利用其凝集绵羊红细胞的程度来检测溶血素的水平。 血清凝集程度一般分为5级，受试样品组的抗体水平显著高于对照组的抗体水平，判断阳性，数据处理采用方差分析。 级别显示：++++ 所有红细胞均凝集-----说明凝集能