人子宫颈粘液抗菌多肽的分离.pdfVIP

西医大 1998 ④ J W CUM S 12…9(～1) 25~28 2 — ． 人子宫颈粘液抗菌多肽的分离 7，．『，弓。淖 黄 宁 潘小玲 吴 琦 王伯瑶 李成粱 l_基面萑军 理至i磊-研奎(成都61o041)，2．耐属第二医院妇产辩 内客摘要 用 5 己酸提取人子宫颈粘涟可溶物 ，经电泳凝腔琼脂糖弥散法抗菌试验发现 ，子宫颈 粘涟酸溶性提取物有两条主带对致病性大陌杆菌25922株和全葡球菌 25923株有强抗菌活性 ，并分别 ＼ 由名为Hcp一1和Hcp．-2。经Trlcine--SDS电泳分折．Hcp一1分子量为6．7kd、10妇1和 15．4kd，Hcp．． 2分子量为4．4kd、6．7kd、Okd和 15．4kd，均为多肚混合物。实验结果提示子宫颈粘膜能合成一类抗菌多 女性急性盆腔炎的重要原 因之一是下生殖 留量的透析带透析 48小时 。冷冻干燥 ，一2O℃ 道菌群的上行扩散，以及精子携带外源性细菌 保存。 的侵入[1】传统认为子宫颈粘液具有理化屏障 1．3 子宫颈粘液酸溶性提取物电泳分析 作用，其存在 的溶菌酶 能保护 宫腔避 免感 按Panyim等 的方法作酸性尿素聚丙烯 染0]。近年来在抗感染防御机理中，有关天然 酰胺凝胶 电泳(Au—PAGE)，胶浓度 12．5 ，胶 免疫 内源性抗生素肽的研究取得 了重要进 厚 O．75ram，150V顶 电泳 9O分钟，加样 150V 展_5]，本研究从人子宫颈粘液酸溶性提取物中 电泳 9O分钟，电泳后凝胶用考马斯亮蓝R．250 分离出新的抗菌多肽分子，现报道如下。 、 染色 。 1．4 子宫颈粘液酸溶性提取物抗菌多肚分析 1 材料和方法 采用电泳凝胶琼脂糖弥散法n分析抗菌多 1．1 试剂 肽 。所用菌株为致病性大肠杆菌 25922株 (E． Phenylmethylsulfonylfluoride(PMSF)、 coli25922)，金 葡球 菌 25923株 (s．aureus Leupeptin、Pepstatin、溶菌酶和琼脂糖为Sig— 25923)，样 品 经 AU—PAGE 电 泳 后 ，以 ma产品，聚丙烯酰胺凝胶 电泳试剂为Merck 10mmoI／LPBS (pH7．4)振荡洗涤 3次 ，每次 产品，蛋 白质分子量标准为Gibco产品，Tricine 1O分钟。将 电泳凝胶置于底层琼脂[含 1 琼脂 为Fisher产品，其余试剂为国产分析纯。 糖，0．03 营养 肉汤粉，10mmol／L柠檬酸一磷 1．2 子宫颈粘液酸溶性提取物的制备 酸氢二钠缓冲液 (pHS．5)，以及对数生长期细 子宫颈粘液取 自我校附二院妇产科门诊宫 菌 1O。／r,d)，37℃孵育 3小时，取出凝胶，在底 颈、阴道未见炎性病变患者。宫颈粘液溶于含 层琼脂上覆盖一层 2×营养琼脂 (含 1 琼脂 1reotol／L PMSF，10~mol／L Leupeptin 和 糖，6 营养肉汤粉)，37℃孵育过夜。 10~tmol／LPepstatin的5 乙酸溶液中，电动匀 1-5 子官颈粘液酸溶性提取物抗菌多肽分子 浆，低温离心弃