人骨髓间充质干细胞的分离.docVIP

人骨髓间充质干细胞的分离、培养与鉴定 彭亮权1，王大平1，何春耒1，朱伟民1，周 可1 谢礼涵2，黄俊峰1，徐小平1，刘健全1，欧阳侃1 （1.深圳市第二人民医院，深圳518035；2.深圳市西乡人民医院，深圳518035） 【摘要】目的:探讨密度梯度离心结合贴壁筛选法分离培养人骨髓间充质干细胞(MSCs)的条件，为组 织工程选择合适的种子细胞奠定基础。方法:采用密度梯度离心法将人MSCs自少量骨髓中分离并培养，观察其增殖和生长特性，绘制生长曲线，测定贴壁率，免疫组化与流式细胞仪细胞表型鉴定。结果:人MSCs生物性状稳定，不同代次生长曲线相似，第5~6d细胞数目最多；传代后10h贴壁率高达90%。MSCs表达CD44、CD90，但不表达CD34、CD45。结论:密度梯度离心法是分离人MSCs的理想方法，MSCs能为组织工程提供足量种子细胞。 【关键词】骨髓间充质干细胞；细胞培养；组织工程 【中图分类号】Q813.1【文献标识码】A【文章编号】1001-165X（2009）03-0321-04 Isolation,cultureandidentificationofhumanmesenchymalstemcellPENGLiang-quan,WANGDa-ping,HEChun-laietal. TheSecondHospitalofShenzheng,Shenzheng518035,China 【Abstract】Objective:Toinvestigateisolatingandculturingconditionsofhumanmesenchymalstemcells(hMSCs)invitrobydensitygradientseparationmethodforselectingsuitablebonetissueengineeringseedcells.Methods:hMSCswereisolatedbydensitygradientseparationmethodandcultured.Theproliferationandgrowthcharacteristicsofprimaryandpassagecellswerestudiedbythedetectionofgrowthcurveandadhesionrare,whileflowcytometryandimmunohistologymethodswereusedtoidentifythephenotypesofculturedcells.Results:hMSCsgrewwellinvitro,withthesimilargrowthcurveamongdifferentpassagecells.Thenumberofcellsreachedthepeakatthe5and6days.Mostofcellsadheredtothewallwithin10hoursculturing.hMSCswerepositiveforCD44andCD90，however,negativeforCD34andCD45.Conclusions:ThedensitygradientseparationmethodisanidealwayforisolatingofhMSCs，whichisreliabletoobtainenoughseedcellsforbonetissueengineeringresearch. 【Keywords】mesenchymalstemcells；cellculture；tissueengineering 【收稿日期】2008-12-16【基金项目】深圳市科技计划项目资助(200630)【作者简介】彭亮权(1979-),男,在读硕士,研究方向：创伤骨科、骨组织工程、运动医学,E-mail:pengllqq@163.com 【通讯作者】王大平,教授,硕士生导师，E-mail:dapingwang@ 种子细胞是组织工程学研究中最基本、最重要的环节。骨髓间充质干细胞(mesenchymalstemcells，MSCs)具有造血支持、免疫调节、多向分化等潜能，易于转染和表达外源基因，是细胞治疗和基因治疗理想的载体和靶细胞[1,2]。种子细胞的获得和培养传代是组织工程的基本要素，细胞主要来源于自体、同种异体及异种组织细胞等，而自体组织细胞为首选。组织工程需要高浓度的种子细胞接种，间充质干细胞具有高度增殖、自我更新的能力，而且来源广泛[3~5]，且其具有来源充足、取材方便、创伤小、无排斥反应、增殖能力强等特点，成为组织工程较为理想的种子细胞来源[4]。骨髓中间充质干细胞的含量极少，因此体外纯化和扩增极其重要。2001年Reyes等[6]报道了提取纯化扩