儿童外周血成纤维细胞集落培养方法初探.pdfVIP

维普资讯 一 苏州医学院学报1998；18(tO) 1015 儿童外周血成纤维细胞集落培养方法初探 2Z2 苏州医学院人体解剖学教研室 (215007) 墨 茁登顺 苏州医学院基园工程研究室 李丽螭 盛伟华 董宁征 杨吉成 摘要 取健康儿童无苗外周血，用 I．1l9g／ml淋巴细瞻分离液分离细胞，制成单细胞悬}瘦进 行培养，培养开始时加入 1，25双羟基维生素D：和碱性成纤维细胞生长困子，刺激促进成纤维前 体细胞分化增殖 ，形成成纤维细胞集落，建立 了培养方法。为儿童血循环中存在同充质干细胞的假 说提供了初步实验依据 ，并为儿童骨角2}、肌肉营养代谢性痰病和造血系统疾病研究提供了新的途 径 。 关键词壁堑苎塑堕苎；培养；』；堑旦L 拿刮 午 中囝法分娄 R329．2 ’ 问充质干细胞具有多向分化、自我更新 悬液 。 和增殖能力，体外培养可形成成纤维细胞集 1．4．2 戚纤维细胞培养 ：用细胞培养液调整细胞浓 落 (CFU—F)，经诱导可向骨、软骨、肌 肉和肌 度至 1．5×10’，L，接种于小培养方瓶 中，种入细胞 约 ．5×10十，开始培养对加入 I：25取瓷基维生 腱等方向分化 ，并具有支持造血的功能，巴有 索D】和碱性成纤维细胞生长困子，于37c，体积分 不少研究者从动物和人骨髓、脐血 、胎血中培 数为0．05COz、饱和湿度下培养。每 3～4天半量按 养 出CFU-F ]。但 尚无儿童外周血形成 液 t次，第 1t～l2天终止培养，将培养液全部倒出， CFU—F的报道，我们在此方面进行了探索， 用无钙镁PBS把培养瓶轻轻洗两遍，加 t0 中性福 初获成功，报告如下。 尔马林固定lomin，再分别加入苏术素和伊红染色 1 材料与方法 液，将细胞表面覆盖，行 HE染色，倒置显微镜下观 察细胞形态，并以6十以上成纤维细胞组成的集落 1．1 标本来源：2月，1 岁摧康儿童 2倒，无苗职 为一十成纤维细胞集落形成单位 (cFu—F)，细胞 外周血 2ml。 数5o～100为中等集落，100的为大集落 ，计数成 1．2 分离液的配制：取 lO份 5O Hypaque(上海信 纤维缅胞集落数 。 谊药厂)、Z0份 9 F~coll(上海华美生物工程公司) 1．5 结果 ：培养第 3～4天，细胞形态开始明显分 配制成比重为 1．119g／ml淋巴细胞分离液。 化，出现散在的、棱形、多角形的成纤维细胞和大扁 1．3 培养体系；于含有 3O 小牛血清 的RPMI 圆内皮样细胞与单棱 ／巨噬细胞混杂分布，以上细胞 16~0细胞培养液中加入维生素c(江苏江安制药公 均贴壁生长。成纤维细胞胞体透亮，折光性好。至第 司产品)50mg／L、青霉素 100kU／L、链霉 素 lOO