第五章 菌种保藏的原理和方法.pptVIP

第五章 菌种保藏的原理和方法 提纲 菌种保藏的目的和意义 菌种保藏的原理和方法 斜面保藏法和穿刺保藏法 沙土管干燥保藏法 真空冷冻干燥保藏法 液氮保藏法 菌种复壮 种子扩大培养 菌种保藏的目的和意义 目的意义：保持优良菌种优良性状的稳 定，满足生产的实际需要。 优良菌种丢失（退化）的原因： 世代短、易变异、易污染、死亡。 菌种保藏机构：世界现有700多家专门机构。 措施：创造条件，使微生物处于休眠状 态，减少变异。 低营养、低温、干燥、缺氧→低代谢、低生长 菌种保藏的原理和方法 菌种保藏(Culture conservation)原理 挑选优良的菌种，最好是休眠体 创造有利于种子休眠的环境（低温、干燥、缺氧、避光、缺少营养） 菌种保藏方法 斜面(Slant)低温保藏法 传代培养，六个月 砂土管保藏法 适用范围广，两年 冷冻干燥(Freez-drying)保藏法 长达十年 液氮超低温保藏法（-130℃） (Liquid nitrogen ultra-low temperature storage) 一、斜面保藏法和穿刺保藏法 1.斜面保藏法：（短期，3-6个月） 范围：细菌、放线菌、酵母、丝状真菌 方法：适宜培养基→适温培养→冰箱保藏 （4-5℃）→到期转种 优点：设备、方法简单 缺点：转代多，易变异；污染机会多 一、斜面保藏法和穿刺保藏法 2.穿刺保藏法：（好气菌，6-12个月） 方法：小试管或螺口管→1﹪琼脂培养基→接种 针穿刺→培养→盖2-3mm无菌液体石蜡 →冰箱保藏 范围：细菌、放线菌、丝状真菌 优点：范围较广，简便实用 缺点：不适用能利用石蜡为碳源的微生物；不同种类， 保藏期差异较大。 二、沙土管干燥保藏法 范围：产孢子的放线菌和丝状真菌，形成芽孢 的细菌。 方法：沙、土分别洗净→烘干、过筛（80-100目）→ 1-2 ︰ 1沙土混合、装管1cm→121℃灭菌2-3 次→无 菌检验→烘干备用→孢子或悬液与沙土混匀→真空抽 干→封口（熔封、石蜡封）→干燥器中于冰箱5℃保藏 特点：设备简单，方法较繁，效果较好（长，2 年，有长达10年），但范围受限制。 三、真空冷冻干燥保藏法 方法： 1.安瓶管处理：8-10×100-150mm，浸洗、烘干、 盖口；灭菌、干燥（60℃）。 2.保护剂：减少冷冻干燥对微生物的损伤，常用脱脂 牛奶、血清（适当方法灭菌）。 3.菌悬液制备：斜面→加保护剂→ 制悬液→吸入安管 4.冷冻干燥：快冷至-15- -30℃ ，抽真空，15 分钟内达到66.661Pa ；升到13.3322Pa，升温至20-30℃ ；真空封口。 5.安瓶管保藏： 4-5 ℃ ，5-10年。（样品含水量1-3％） 四、液氮保藏法 方法： ①浓菌悬液→加保护剂→装安管0.2-1cm →封口 ②降温（1℃/min）至-25 ℃，入液氮罐，-150 — -196 ℃保藏。 ③取出时，应于温水（38-40 ℃ ）中震荡1-2min。 特点： 效果好（2-3年，长达9年），方法简单， 保藏对象广泛。 五、菌种复壮 原理与方法 单细胞分离复壮 改变培养条件复壮 六、种子扩大培养 种子(Seed)扩大培养： 将保藏的生产菌种从斜面试管(Tube slant)接出后，进行摇床(Shaker)培养及种子罐(Seeding tank)逐级培养以获得一定数量和质量的纯种的过程，纯种培养物称作种子。 六、种子扩大培养 种子扩大培养的级数 二【三】级发酵：斜面菌种-一级种子摇床培养-二级种子罐培 养【-三级种子罐培养】-发酵罐生产 影响级数的因素 微生物自身的生长特性 发酵罐的生产规模 六、种子扩大培养 影响种子质量的主要因素 培养基(Culture media)中的成分配比 种龄(Cell age)与接种量(Inoculation concentration) 温度 pH值 通气(Ventilation)和搅拌(Stirring) 泡沫(Foam) 染菌(Infection) 本章知识结构 斜面保藏法和穿刺保藏法 ★