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分子标记技术在茶树研究中的应用 陈志辉 (福建农科院茶叶研究所，福建福安355015) 植物遗传、育种中最早应用的标记是形态学 基本原理：引物根据与微卫星重复序列两翼 标记，这类标记数量有限，而且要找到与目标性 的特定短序列设计，用来扩增重复序列本身。在 相关的形态学标记实际上是非常困难的。后来又 STMS上发展和相近的分子标记有以下几类：1． 相继开发了生理、生化、细胞、发育等多种形式 加锚微卫星寡核苷酸，扩增的是反向排列的间隔 的遗传标记。同工酶标记在过去的二三十年得到 不太大的重复序列间的基因组节段进行PCR扩 了广泛的应用，但由于技术上的限制，可供利用 增，这类标记又被称为ISSR、ASSR或AMP—PCR。 的同工酶标记数量极为有限。近10多年来，DNA如果一个是57端加锚的ASSR引物，另一个是随 多态性分子标记的发展为遗传标记提供了一个 机引物，则被称为RA肝技术。2．SCAR技术。3． 快速、准确、大容量的标记方法。理想的分子标 CAPS技术，及在此基础上发展出的dCAPS技术。 记必须达到以下几个要求：(1)具有高的多态性： 4．SPAR技术，扩增的是SSR之间的DNA序列。又 (2)共显性遗传，即利用分子标记可鉴别二倍体 称为MP-PCR。5．DAMD技术，直接用小卫星的核 PCRlike 中杂合和纯合基因型；(3)能明确辨别等位基因： 心序列作引物进行扩增。6．Inter—Alu (4)除特殊位点的标记外，要求分子标记均匀分 genomicprofiling，扩增的是Alu序列之间的 布于整个基因组：(5)选择中性(即无基因多效DNA序列。7．ISTR技术，扩增的是copia序列 性)；(6)检测手段简单、快速(如实验程序易自之间的DNA序列。8．IFLP检测的对象是内含子 动化)；(7)开发成本和使用成本尽量低廉；(8)的长度差异。9．RA肝0技术。10．RFLP—PCR技 在实验室内和实验室间重复性好(便于数据交 术。 换)。 1．2．3扩增片段长度多态性(AFLP) 其基本原理：把DNA进行限制性内切酶酶切， 1分子标记的种类 在所有的限制性片段两端加上带有特定序列的 1．1限制性片段长度多态性(RFLP) 7端有几个随机 “接头”，用与接头互补的但3 RFLP技术是发展最早的分子标记技术。其选择的核苷酸的引物进行特异PCR扩增，只有那 原理是检测DNA在限制性内切酶酶切后形成的 些与37端严格配对的片段才能得到扩增。在 特定DNA片段的大小。 AFLP的基础上发展出AFRP技术，加的PCR引物 1．2以POR为基础的分子标记 中一侧为AFLP引物，一侧为随机引物。 I．2．1随机扩增多态性嗽(RAPD) 1．2．4单核苷酸多态性(渊P)技术 RAPD基本原理：该技术用一个(有时用两个) 检测单核苷酸差异，因为同一位点的不同等 随机引物(一般8一lO个碱基)非定点地扩增位基因之间常常只有一个或几个核苷酸的差异， DNA片段，然后用凝胶电泳分开扩增片段。RAPD 因此在分子水平上对单个核苷酸的差异进行检 技术的发展和相近的分子标记种类：AP—PCR， 测是很有意义的。 DAF，及在DAF技术基础上又发展出了ASAP技术。 2分子标记技术在茶树研究中的应用 i cr