分子印迹整体柱管内固相微萃取和毛细管电泳-电化学检测器结合测定尿样中的8-OHdG.pdfVIP

第十七届全国色谱学术报告会及仪器展览会会议论文集 o．C003 分子印迹整体柱管内固相微萃取与毛细管电泳．电化学检测器结合 测定尿样中的8-OHdG牛 张少文a,b，邹存杰c，吴采樱a”，，翁前锋c a武汉大学，武汉430072；b洛阳理工学院，洛阳，471023 16029 c辽宁师范大学大连1 本文首先通过原位聚合在毛细柱管内用鸟苷做替代模板分子制作了对8-OHdG有较好萃取富集 作用的分子印迹整体柱，然后与毛细管电泳一电化学检测器一起成功应用于尿样中8-OHdG的测定。 关键词：分子印迹，管内固相微萃取，毛细管电泳，8-OHdG 1 实验部分 1．1仪器与试剂 电化学分析仪(型号CHI800，CH设备公司，奥斯汀，德克萨斯，USA)；电解池由三电极体系构成： 工作电极为碳纤维微盘电极(自制，约30根碳纤维)，辅助电极为Pt电极，参比电极为饱和甘汞电极。 购白永年锐丰光纤维厂(永年，河北)。 液相色谱仪LC．10AT和SPD．10A紫外检测器(岛津，日本)。 苏里，USA)．所用的其它药品试剂均是分析纯，购自上海国药集团(上海)。 1．2电泳和色谱条件 液(pH=9．00)；电泳电压：20kV，进样时间：20s；检测电位0．45V。 C18column：250mmx4．6mm 色谱：色谱柱Allure I．D，5pm(Restec，P．A，USA)， 流动相：甲醇：0．1％醋酸：l：9，流速：ImL／min．，检测波长：254nm． 1．3印迹富集毛细管柱制作 用鸟苷做替代模板分子，丙烯酰胺和4一乙烯基吡啶做功能单体，N，N一亚甲基双丙烯酰胺做交 联剂，二甲亚砜和十二醇做致孔剂，超声，通N2除去预聚体中的02，在预处理过的530pm毛细管 测直至没有鸟营检出才停止对印迹富集柱的冲洗。 1．4尿样处理 尿样采白自愿者的晨尿，冰箱中冷冻保存。分析时取20mL尿样自然解冻，5000rpm高速离心 20min．，将上清液在减压条件下旋转蒸干，真空干燥1h，再用甲醇清洗一次，最后将尿样转移为等体 积的乙腈溶液。 1．5萃取富集 用2mL处理好的尿样，以0．03mL／min．速度通过印迹柱进行萃取富集。解析后，解析液调整为 0．05mM磷酸盐缓冲液(pH=6．50)。 2结果与讨论 ‘围家自然科学綦金资助项目 ”通讯联系人，．吴采樱，Email：cywu@whu．edu．cn 第十七届全国色谱学术报告会及仪器展览会会议论文集 2．1分子印迹毛细管柱的性能 实验结果表明毛细管内分子印迹整体柱对籼HdG有较好的富集能力。在优化实验条件下，印 过分子印迹柱的萃取富集后的电泳对比图如图1。 250 200 150 圣ce_|了o ioo v青∞a 50 0 300 600 700 800 900 ．400,500 mrationtimelseC ig 图1．尿样与加标200nM8．OHdG尿样经分子印迹柱萃取富集后的电泳对比图 电泳条件：BGE：20mM硼砂缓冲液(pH9．40) 尿样电解质：(20raM磷酸盐缓冲液，pH=6．50)， x10s， 电泳电压：25kV，检测电位：0．5V(vs．SCE)，进样时间：20kV 毛细管：i．d．259mx65cm，灵敏度：le-lOAⅣ， 8-OHdG尿样 a．尿样：b．加标200nmol／L 方法的线性范围和检测限