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半乳糖苷酶基因在大肠杆菌中过量表达及IPTG诱导条件.pdf
第 21 卷第 5 期 无 锡 轻 工 大 学 学 报 Vol. 21 No. 5
2002 年 9 月 Journal of Wuxi University of Light Industry Sep. 2002
( )
文章编号 :1009 - 038X 2002 05 - 0492 - 04
半乳糖苷酶基因在大肠杆菌中过量表达及 IPTG 诱导条件
陈 卫 , 葛佳佳 , 张 灏 , 丁霄霖
(江南大学 食品学院 ,江苏 无锡 214036)
( )
摘 要 : 从嗜热脂肪芽孢杆菌 IAM11001 中克隆出编码热稳定的半乳糖苷酶蛋白基因 bga B ,构
( ) ( )
建具 T7 强启动子的p ET20 b bga B 质粒 ,并在大肠杆菌BL21 DE3 中进行表达. 经 IPTG 诱导
后 ,重组菌周质中乳糖酶酶活达到 0. 12 U/ mL ,胞内酶活为 1. 35 U/ mL ,比酶活为 6. 66 U/ mg 蛋
白,比酶源菌产生的酶活提高50 倍. 通过对 IPTG 诱导时机、诱导浓度和诱导时间的优化研究 ,重
组菌产生的比酶活进一步提高至酶源菌的 90 倍.
关键词 : 嗜热脂肪芽孢杆菌 ;β
半乳糖苷酶 ;基因克隆 ; T7 表达系统 ;大肠杆菌 ;诱导条件
中图分类号:Q 78 文献标识码 : A
Overexpression of βgalactosidase Gene bga B in Escherichia coli
and Studies on IPTG Induction
CHEN Wei , GE Jiajia , ZHAN G Hao , DIN G Xiaolin
( School of Food Science Technology , Southern Yangtze University , Wuxi 214036 , China)
β ( )
Abstract : A thermostable galactosidase gene bga B from B acill us stearothermophil us IAM11001
was cloned into p ET20 (b) vector and expressed in Escherichia coli BL21 (DE3) . Expression was in
duced by IPTG , and the periplasmic and cytoplasmic enzyme activit y reached 0. 12 U/ mL and 1. 35
U/ mL respectively. The specific activity of recombinant protein reached 6. 66 U/ mg protein , 50fold
higher than original strain.
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