热稳定生物素化荧光素酶的制备及其在焦测序中的应用.pdfVIP

38 (FENXI HUAXUE) 4 第 卷 分析化学 研究报告 第 期 2010 4 Chinese Journal of Analytical Chemistry 458 ～ 463 年 月 檵檵檵檵檵檵檵殝 檵 殝 檵 研究报告 檵 檵 殝 殝檵檵檵檵檵檵檵 DOI :10. 3724 / SP. J. 1096. 2010. 00458 热稳定生物素化荧光素酶的制备及其在焦测序中的应用 1 1 ，2 1 ，2 1 1 * 1 ，2 朱术会 邹秉杰 武海萍 马寅姣 陈颖 周国华 1 ( ， 210009) 2 ( ， 210002) 中国药科大学生命科学与技术学院 南京 华东医学生物技术研究所 南京 ， 摘 要 新一代大规模焦测序技术需要稳定的可固定化的荧光素酶 为了制备热稳定性好且被生物素化的 ， C 87 (BCCP87) 荧光素酶 本研究采用基因工程方法将生物素羧基载体蛋白 端 个氨基酸残基 与荧光素酶在大 E. coli BL21 (DE3) ， (BCCP-LUC); 肠杆菌 中进行融合表达 以实现菌体内直接表达生物素化的荧光素酶 并对 (Photinus pyralis) ; 北美萤火虫 荧光素酶基因进行了定点突变以增强其热稳定性 用链亲和素包被的磁珠对重 ， 。 : 50 ℃ ; 组融合蛋白进行固定化 用于焦测序 实验结果表明 突变后的荧光素酶在 环境中仍具有活性 在 43 ℃ 10 min 80% ， 。Western blot ， 下 活性保留大于 热稳定性明显增强 分析结果表明 荧光素酶能够在大肠杆菌 5 。 BCCP-LUC (2. 1 × 10 RLU / L Beads)， 内生物素化 用链亲和素包被的磁珠结合 后具有较高活性 μ 经过多次洗 。 ATP DNA ， 涤活性无明显下降 采用微球固定的荧光素酶以及 硫酸化酶成功的进行了 序列的测定且定量准确 ， 、 。