植物小孢子母细胞减数分裂过程中胼胝质染色的新方法.pdfVIP

植物学通报Chinese Bulletin of Botany 2008, 25 (4): 455458, w w w .chinbullbotany .com .技术与方法. 植物小孢子母细胞减数分裂过程中胼胝质染色的新方法 1 2 1* 刘晓瑞 , 陈祖铿 , 刘家熙 1 首都师范大学生命科学学院, 北京10004 8; 2 中国科学院植物研究所系统与进化植物学国家重点实验室, 北京100093 摘要 利用改良苯酚品红- 苯胺蓝压片法, 观察小孢子母细胞减数分裂过程中胼胝质的动态变化。使用该方法简便、快速且 省时, 获得的照片颜色鲜艳, 细胞质呈红色, 染色体为深红色, 胼胝质呈黄绿色荧光, 对比明显, 有三维效果。单用改良苯酚品 红染液对新鲜材料进行压片, 在蓝光激发下, 细胞质与染色体呈红色荧光, 染色体清晰。实验结果表明, 改良苯酚品红染液可 作为荧光染料代替DAPI及H3 32 58 等昂贵的核染料, 从而降低实验成本。 关键词 苯胺蓝, 胼胝质, 改良苯酚品红染色液 刘晓瑞, 陈祖铿, 刘家熙 (2008). 植物小孢子母细胞减数分裂过程中胼胝质染色的新方法. 植物学通报25 , 455458. 胼胝质(王元军, 2005; 郝建华和强胜, 2006)是-1, 酸酚水溶液中(2 周内使用)。染色液: 取55 mL 原液B , 3 葡聚糖的混合物, 具有迅速聚合和解聚的生理特性。 加入6 m L 冰醋酸和6 m L 37% 的甲醛(放置2 周后使 胼胝质在植物的筛管代谢和配子体发育等生命活动中发 用) 。(2 ) 乙液的配制。取甲液2-10 m L, 加入9 0 -98 挥着重要的调节作用, 其合成及分解直接影响植物正常 mL 45% 的醋酸和1.8 g 山梨醇, 即为改良苯酚品红染 的生长代谢过程。因此, 胼胝质代谢是植物研究中的重 色液。放入棕色瓶中保存备用(放置2 周后使用, 可使染 要内容之一。利用苯胺蓝对胼胝质的专性反应——在 色能力显著增加) 。 紫外光激发下发出黄绿色荧光, 检测胼胝质动态的方法 已有大量文献报道(李师翁和屠骊珠, 1990; Adrienne et 1. 1.2 0.0 1％水溶性苯胺蓝 al ., 2005; Penet et al ., 2005; 申业等, 2006)。本文报 将0 .0 1 g 水溶性苯胺蓝加入100 m L 0 . 1 mol ·L-1 pH 道一种利用苯胺蓝和改良苯酚品红压片法观察小孢子母 7 .2 的P B S 缓冲液中。 细胞减数分裂过程中胼胝质动态变化的新方法。 1.2 取材与压片 1 材料与方法 取小孢子母细胞减数分裂时期的百合科大百合属植物大 百合(Cardi ocrinum gigant eum (W all.) Makino)和百合 1. 1 染色剂的配制 科萱草属植物大苞萱草(Hem eroc alli s mi dden dorfii 1. 1.1 改良苯酚品红液 Trautv. et Mey .)的花蕾, 不经过固定, 直接取出花药, 放 参照何兰花和卢家现(2000)的方法配制改良苯酚品红液 入滴有改良苯酚品红染液的载玻片上。将花药横切为2 (石碳酸- 品红染色液) 。( 1) 甲液的配制。原液A : 将3 g 段, 用镊子轻捏花药将进行减数分裂的小孢子母细胞释 碱性品红溶于100 m L 7 0% 的乙醇中(此液可长期保 放出来, 均匀分布在染液中, 盖上盖玻片, 染色10-15 存)。原液B : 取10 m L 原液A 加入90 mL 5% 的石碳 分钟, 直