髓系白血病干细胞培养及其特征鉴定.pdfVIP

0f 249 chineseJo啪alclinical 临床检验杂志2008年第26卷第4期 Laboratoryscience，2008，VoL26，No．4 文章编号：1001-764x(2008)04_0249讲中图分类号：R733．7 文献标识码：A ·论著· 髓系白血病干细胞培养及其特征鉴定木 院血液科，江苏常州213003；4．江苏大学附属医院检验科，江苏镇江212001) 摘要：目的对急性髓系白血病(AML)骨髓单个核细胞进行体外培养，获得白血病干细胞并进行特征鉴定。方法体外培养 AML患者的骨髓单个核细胞，观察其形态学特征、长期存活及增殖特性，用染色体分析和流式细胞分析技术研究其核型和细 培 养的白血病细胞呈集落样悬浮生长，在体外能存活12个月以上并保持增殖特性。染色体核型呈亚四倍体。表达上述干细胞 经培养获得的白血病细胞，具备肿瘤干细胞的一些特征，提示为白血病千细胞。 关键词：白血病干细胞；基因表达；表面标志 白血病是正常造血过程中某一阶段细胞恶性扩 1．4细胞培养和增殖能力分析无菌抽取病人骨 Ficoll淋巴细胞 增的单克隆异质性疾病。白血病发生发展、治疗耐 髓，用等量PBS稀释，用1．077g／ml 药和容易复发的根本原因在于患者体内存在一群白 分离液密度梯度离心，取单个核细胞层洗涤，用含 stem 血病干细胞(1eukemiacells，LSC)¨J，虽数目极10％胎牛血清的L—DMEM培养基调整细胞浓度，接 少，但能自我更新，具有一定的分化能力。在长期的 种于培养瓶中，37℃，饱和湿度，5％C02培养箱长 白血病细胞培养中，本室从急性髓系白血病(acute-期培养，每2～3d换液一次。于倒置显微镜观察并 照相；收集细胞计数，接种于24孔培养板，每孔8× myeloidleukemia，AML)患者的骨髓单个核细胞中培 养出能在体外长期存活且具有增殖和分化能力的细 103，每天收集2孔细胞，分别计数，取平均值，连续 胞集落，并对其进行特征鉴定，为克隆获得LSc进 计数11d，绘制细胞生长曲线。 行实验研究。 1．5 流式细胞术检测表面标记 收集细胞约1．5 l材料和方法 1．1 主要试剂 L—DMEM培养基和胎牛血清 (FCS)为Gibco公司产品，％zol及RT．PCR试剂盒两种不同标记的荧光抗体，4℃置30min，PBs洗涤 离心，再加入PBS悬浮，上机检测。 为Invi咖gen公司产品，CD34、CD38、CD71、CDl05、 1．6染色体检查将处于对数生长期的LSC加入 cD2、CD44、cD29等荧光标记抗体为BD公司产品， Marker h dN，IP、TaqDNA聚合酶、DNADL2000为终浓度为0．05斗g／ml的秋水仙素中，37℃温育1 000 Tak啪公司产品。 后，转移到离心管中，l r／min离心10min，加入 37℃预温的0．075moL／L的KCl溶液8ml，37℃放 1．2主要仪器倒置相差显微镜(，IE300，Nikon公