通脉醒脑滴丸对线栓法致脑缺血再灌注大鼠PI3KAkt信号转导通路的影响.pdfVIP

通脉醒脑滴丸对线栓法致脑缺血再灌注大鼠 PI3K/Akt 信号转导通路的影响 陈小睿，黄雷雷，孟宪丽*，唐光曦，李佳川 成都中医药大学药理研究室，成都 (610075) E-mail ：icelolly@ 摘 要：目的：探讨中药复方制剂通脉醒脑滴丸防治脑缺血卒中的作用机理。 方法 选用 线栓阻断大鼠大脑中动脉法复制脑缺血再灌注模型，采用荧光定量PCR方法测定脑组织 PI3K 、Akt和PTEN的表达，并通过免疫组化方法测定脑组织HIF-1α和VEGF 的表达，考察通 脉醒脑滴丸对PI3K/Akt信号通路的作用。结果：通脉醒脑滴丸能上调脑组织PI3K 、Akt 、HIF-1α 以及VEGF 的表达，下调PTEN的表达。结论：研究初步证实通脉醒脑滴丸对脑缺血损伤具 有保护作用，其机制可能与介导PI3K/Akt细胞存活通路的激活或上调有关。 关键词：通脉醒脑滴丸，脑缺血，再灌注，PI3K/Akt ，信号通路 脑缺血卒中作为临床常见的危急重症，一直备受关注。对脑缺血的治疗核心在于对神经 元损伤的保护以及溶栓再通。是否能在脑缺血卒中发生后，尽可能延缓细胞凋亡组织坏死的 进程，减轻神经元的损伤，重新疏通血管或建立有效的代偿循环，是考察药物对脑缺血保护 作用的要点。 本实验重点对中药复方制剂通脉醒脑滴丸防治脑缺血卒中的可能作用机制进行了探讨， 以期为中医药防治脑缺血的作用机理研究提供新的思路。 1 材料与方法 1.1 试验药物 受试药物：通脉醒脑滴丸，成都润华堂药业有限公司，批号：070530 。规格：10mg/ 粒。用法用量：口服，每日88 粒，分四次服用。主治缺血性中风引起的半身不遂、口眼歪 斜、言语不利、偏身麻木等。 阳性对照药物：尼莫地平片，山西亚宝药业集团股份有限公司，批号：070109 。规格： 20mg/片。用法用量：用于治疗缺血性脑血管病，口服，每日30～120mg。 1.2 试剂 引物合成及探针修饰：上海生物工程有限公司；Trizol，美国MRC 公司；RevertAid™ First Strand cDNA Synthesis Kit，立陶宛MBI 公司；Taq DNA 聚合酶、PCR 反应缓冲液（10×）、 MgCl2 溶液（25mM ）：购自北京博大泰克（BioDev ）生物基因技术有限责任公司；dNTP ： 购自美国普洛麦格（Promega ）公司；DNA 分子量标准（DNA Marker ：Marker I ，显示条带： 100、200 、300、400 、500、600bp，购自北京TIANGEN 公司；琼脂糖（电泳级）：法国BIOWEST 公司产品，上海Yito 企业有限公司分装。；Rabbit Anti-Hif-1 alpha ，北京博奥生物技术有限 公司；Vasculaf Edothelial Factor Musose Anti G M727302 ，基因有限公司；其它实验室常备试 剂均为国产分析纯。 1.3 主要仪器 FTC2000 实时荧光定量基因扩增仪，加拿大枫岭（FUNGLYN ）公司；PE9600DNA 扩 增仪，美国PE 公司；MSE Micro-Centaur Centrifuge 微型台式离心机，日本Sanyo 公司；水 - 1 - 平电泳仪，美国BIO-RAD 公司；Gel Doc 1000 凝胶成像系统，美国BIO-RAD 公司。leica rm 2135 石蜡切片机，德国；Olympus-BX40 型光学显微镜，日本Olympus 公司；MIAS2000 型 计算机图像工作系统，电子科大金盘多媒体科技有限公司。其它实验室常备器皿、耗材均为 国产优质品。 1.4 动物 SD 大鼠，SPF 级，体重300±20g，雌雄各半，由四川省医学科学院实验动物研究所提 供。合格证号：合格证号：SCXK （川）2004 －15。 1.5 方法 1.5.1 实时荧光定量PCR法检测线栓法致局灶性