黑曲霉葡萄糖氧化酶基因的克隆及其在酵母中的高效表达.pdfVIP

卷 期 生 物 工 程 学 报 ! # ’( ) ! *’ )# 年 月 $%%! !#$%% ’()*$+, (- .#(/%0$(,(12 +,(- $%%! !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 黑曲霉葡萄糖氧化酶基因的克隆及其在酵母中的高效表达 ! ! ! $ 0 周亚凤 张先恩 刘虹 张成刚 FB=’- 9 G H7II ! （中国科学院武汉病毒研究所 武汉 #0%%!） $ （中国科学院沈阳应用生态研究所 沈阳 !!%%!/ ） 0 （ ， ， ， ， ， ） J;’E=4:;IBK- L4A7KB:4B M:A4K;7( H’((4?4 ’N OE;4E4 34E=’(’?- P Q4R;E;4 S’R’ OT$FU VW 摘 要 将黑曲霉葡萄糖氧化酶（ ）基因重组进大肠杆菌 酵母穿梭质粒 ，转化甲基营养酵母 GXL . AYMH1 3#0#+ 4 +/(5 *# GO!!/，构建出GXL 的高产酵母工程菌株。在酵母 .67EB’K 及 FXZ! 基因启动子和终止信号的调控下，黑曲霉 ! GXL 在甲基酵母中大量表达并分泌至胞外，经甲醇诱导0 [ #R，发酵液中的GXL 活力可达0% [ #%,\:S。OLO.YFG9 证实GXL 在培养物上清中的含量显著高于其它杂蛋白，约占胞外蛋白总量的5% ] [ % ] ，经^ O4A=7K’I43Q 67IB 6(’C 离子交换柱一步纯化即达电泳纯。重组酵母 比活达 蛋白，是商品黑曲霉 的 倍。动力学 GXL #$5 _50,\:? GXL !_5 性质分析表明，重组酵母 的 和 分别为 和 ‘ ! ，与商品黑曲霉 相比，具有更高的 GXL 6: 7E7B 02 _$/::’(\ S 0#1$ _55I GXL 催化效率。重组酵母GXL 的高活力特性可有效提高葡萄糖传感器的线性检测范围。 关键词 葡萄糖氧化酶，甲基酵母 3#0#+ 4 +/(*# ，基因表达，纯化，动力学分析，生物传感器 中图分类号 文献标识码 文章编号 （ ） ^21 F !%%%.0%5! $%%! %#.%#%%.%5 葡萄糖氧化酶（ ， ，简 G(,E’I4 ’8;R7I4 9H !) !) 0 ) # ! 材料与方法 称GXL ）消耗氧气催化葡萄糖氧化生成葡萄糖酸内 酯，并释放出a X ，广