苯丙氨酸脱氨酶在乳酸乳球菌NICE系统的高效表达及其实验动物研究.pdfVIP

卷 期 生 物 工 程 学 报 ! # ’( ) ! *’ )# 年 月 $%%$ !! !#$%% ’()*$+, (- .#(/%0$(,(12 *’+,-.,/ $%%$ !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 苯丙氨酸脱氨酶在乳酸乳球菌!#$ 系统的高效表达 及其实验动物研究 张晶 刘敬忠 谭淑珍 贾兴元 周艳 （首都医科大学附属北京朝阳医院基础医学研究中心，北京市基因诊断实验室，北京 !%%%$% ） 摘 要 为构建苯丙氨酸脱氨酶的一种更新更高表达的基因工程菌，取得治疗高苯丙氨酸血症大鼠的更佳疗效。 将欧芹CD: @E*D 重组到质粒?*F%3 中，构建翻译融合载体和转录融合载体，分别转化乳酸乳球菌*FG%%% 。对两 种高效表达菌株的酶活性差异进行比较，观察 诱导的动态进程，并利用新鲜培养的 （ ） *9H9B ? *F%30CD: ! I *FG%%% 工程菌进行了高苯丙氨酸血症大鼠（称 动物模型）的治疗实验。结果表明：（）翻译融合型菌株具有更高的酶 CJK ! 活性；（）当 的诱导时间达 时，产物肉桂酸生成量基本达到峰值；（）给高苯丙氨酸血症大鼠灌喂新鲜培养 $ *9H9B #L 2 的 （ ） 工程菌（翻译融合型），观察到该工程菌能显著降低模型动物血中 浓度，从而取得了 ? *F%30CD: ! I *FG%%% CL, 更好的疗效。 关键词 苯丙酮尿症，乳酸乳球菌， 表达系统，基因治疗 *MN8 中图分类号 文献标识码 文章编号 （ ） OP# D !%%%02%#! $%%$ %#0%P!20%1 经典型苯丙酮尿症（以下简称CJK）是由于苯丙 大鼠的治疗实验，使之在大鼠小肠中表达出有活性 氨酸羟化酶（ ）基因缺陷引起肝细胞内 严 的 酶，将食品中的 脱氨，转化成对人体无害 CDQ CDQ CD: CL, 重缺乏所致的常染色体隐性遗传病。由于CDQ 缺 的肉桂酸，从而降低外周血中CL, 浓度，达到治疗 陷，来自膳食及体内循环再利用的苯丙氨酸就不能 CJK 的目的。 正常代谢成酪氨酸，因而患者体内有CL, 及其不正 % 材料与方法 常代谢产物大量积累，后者损伤患儿脑细胞正常发 育而导致智力低下、呆傻。现行治疗方法是低苯丙 % % 质粒与菌株 氨酸饮食疗法，但此法要求严格限制天然蛋白的摄 质粒 ?RS0CD: 含有 CD:0@E*D 基因，由向华博 ［］