蛇足石杉茎尖灭菌方法与组织培养的研究.pdfVIP

安徽农业科学 ,Journal of Anhui Agri . Sci . 2008 ,36 ( 12) :4947 - 4948 ,5025 　　　　　　　　　　　　　　　　　责任编辑 　罗芸 　责任校对 　李洪 蛇足石杉茎尖灭菌方法与组织培养的研究 ( ) 杨雪飞 , 罗建平 , 王 瑛　 合肥工业大学生物与食品工程学院 ,安徽合肥 230009 摘要　[ 目的]研究蛇足石杉组织培养的灭菌方法和培养条件 。[ 方法] 以野生孢子体茎尖为外植体 ,先用不同灭菌液单独或配合使用对 外植体进行表面灭菌 ,将表面无菌外植体转到添加多种抗生素和孔雀石绿的培养基上杀灭内生菌 ,然后将外植体分别接种到不同的培 养基上 ,筛选茎尖培养的最佳灭菌方法和培养条件 。[ 结果] 最佳表面灭菌方法为 70 % 乙醇灭菌40 s ,0 . 1 %升汞溶液灭菌 8 min ,70 %双 氧水溶液灭菌10 min ,培养2 周 ,表面无菌率为63 % 。适宜的杀灭内生菌方法为表面无菌的外植体在附加0 . 5 mg/ L 孔雀石绿和 100 mg/ L 抗生素AAS 的培养基上培养4～6 周 ,无菌率达 52 % 。适宜的培养基为 1/ 4MS 矿质元素+ 1/ 2MS 有机元素 + 2 %蔗糖 + 4 . 5 g/ L 琼脂 ,p H 5 . 8 。在此培养基上茎尖外植体可生长出新枝 ,并可再生根 。[ 结论] 建立了蛇足石杉茎尖组织培养的灭菌方法且筛选出适合其生长的 适宜培养基 ,为蛇足石杉组织培养的深入研究提供实验基础 。 关键词　蛇足石杉;孢子体 ;组织培养;灭菌 + ( ) 中图分类号　S722 . 3 7 　　文献标识码　A 　　文章编号　0517 - 6611 2008 12 - 04947 - 02 Studies on Tissue Culture and Sterilization Method of Huperzia serrata ( ) YANG Xuefei et al 　 School of Biotechnology and Food Engineering ,Hefei University of Technology ,Hefei ,Anhui 230009 Abstract 　[Obj ective ] To study the culture condition and sterilization method of Huperzia serrata . [Method ] Shoot tip s of 1. 0 ～1. 5 cm of wild sporo phytes were selected as explants ,which underwent surface sterilization singly or combined with various disinfectors and internal sterilization with antibiotics and Malachite Green to eliminate the epiphytic and endophytic bacteria and fungi and were next placed on different modifications of MS medium to culture . [ Results] Optimum sterilization method was 70 % C H OH for 40 s followed by 0 . 1 % HgCl for 8 min and subsequent 70 % H O for 10 min ,and aseptic 2 5 2