巨噬细胞RAW264.7的培养及电转染条件的优化.pdfVIP

每 北摩 业 掌报 2010，19(9)：21-24 ActaAgriculturaeBoreali—occidentalisSinica 巨噬细胞 RAW264．7的培养及电转染条件的优化 宋永利 ～，陆 昕。，邱 爽。，祁英培 ，华 松 ， 兰 杰 ，何小宁。，贺小英 ，张 涌。，郑月茂 (1．吉林农业科技学 院 动物医学院，吉林 132101；2．西北农林科技大学 动物 医学院，农业部动物生殖生理与 胚胎工程重点开放实验室，陕西杨凌 712100；3．西安市雁塔区动物疾病预防中心，西安 710061) 摘 要 ：为了建立最优的巨噬细胞 RAW264．7培养方法和 电转染条件 ，在细胞培养时采用两种方法 了解细 胞的培养特性并进行 电转染条件 的优化 ，建立并验证 RAW264．7细胞快速 、无血清培养体系的 电转染方法 。 以绿色荧光蛋 白(GFP)为报 告基 因，进一步优化巨噬细胞 电穿孑L的条件 。通过控制电压 (250～420V)、脉冲 时间、电击次数、温度 、电击缓冲液等转染条件 ，采用不同的条件组合 ，用 电穿孔法将质粒 pEGFP—C1转染于培 养的RAW 264．7细胞 。通过荧光显微镜分析转染效率 ，可见：用胰酶和细胞刮刀消化 RAW264．7细胞 ，细胞 损伤小，形态好。利用优化的电转染条件得 出最佳转染条件是 ：电压 350V、脉冲时间30ms、电击 1次、电击 缓冲液成分为 cell盐和 options且 V(cell盐)：V(options)一3：1、最佳温度 4℃。 关键词 ：巨噬细胞 ；体外培养 ；基 因转染 中图分类号 ：Q813 文献标识码 ：A 文章编号 ：1004—1389(2010)09—0021—04 CharacterjzatiOnofM acrophageCultureandOptimization ofElectric-mediatedTransfecti0n SONG Yongli～，LU Xin。，QIU Shuang ，QIYingpei，HUA Song ，LANJie ， HE Xiaoning ，HE Xiaoying ，ZHANG Yong andZHENG Yuemao。 (1．CollegeofVeterinaryMedicine，JilinAgricultureScienceandTechnologyCollege，Jilin 132101，China；2．CollegeofVeterinary Medicine，NorthwestAFUniversity，KeyLaboratoryofAnimalReproductivePhysi0l0gyEmbryoTechnology，M inistryofAgriculture YanglingShaanxi 712100．China：3．CenterforAnimalDiseaseControlandPrevention，YantaDistrict，Xi’an 710061，China) Abstract：Thispaperintendedestablishingtheoptimalmethodsforcellcultureandelectrictransfection basedonmacrophageRAW 264．7．Forelectrictransfection，parametersinvolvingvoltage，impulsion time，electronic shock times，temperatureand shock buffer solution were investigated． Cultured RAW 264．7cellsweretransfectedwithpEGFP—C1byusingGFPasanindicatordependingondifferent combinationsofparameters．Theresultsshowed thattrypsin digestion combinedwith scraperwere better．with thelessdamagedcel1．Theop